Oppfinnelsen angår næringsmiddelindustrien og kan brukes til å bestemme den totale antioksidantaktiviteten. Metoden utføres som følger: analytten interagerer med reagenset 0,006 M Fe(III) - 0,01 M o-fenantrolin. Askorbinsyre (AA) reagerer med samme reagens, som tilsettes i forholdet 1:100. Inkuber deretter i minst 90 minutter og fotometer ved 510 ± 20 nm. Etter dette etableres avhengigheten av størrelsen på det analytiske signalet på mengden av stoffet, og verdien av total AOA beregnes. Den presenterte metoden gjør det mulig å mindre arbeidsintensivt og mer pålitelig bestemme den totale antioksidantaktiviteten til plantematerialer og matprodukter basert på dem. 2 lønn fly, 1 ill., 5 bord.

Oppfinnelsen angår analytisk kjemi og kan brukes til å bestemme den totale antioksidantaktiviteten (AOA) til plantematerialer og matprodukter basert på den.

Det er en kjent coulometrisk metode for å bestemme den totale AOA av te, basert på interaksjonen av vandige ekstrakter av produktet med elektrisk genererte bromforbindelser (I.F.Abdulin, E.N. Turova, G.K. Budnikov. Coulometrisk vurdering av antioksidantkapasiteten til teekstrakter med elektrisk generert brom // Journal of Analyst. chemistry. 2001. T.56. No. 6. P.627-629). Valget av elektrogenererte bromforbindelser som titrant skyldes deres evne til å inngå ulike reaksjoner: radikal, redoks, elektrofil substitusjon og addisjon ved flere bindinger. Dette gjør at vi kan dekke et bredt spekter av biologisk aktive teforbindelser som har antioksidantegenskaper. Ulempene med denne metoden er muligheten for en bromeringsreaksjon med stoffer som ikke er antioksidanter, og uttrykket av den resulterende verdien av total AOA i elektrisitetsenheter (kC/100 g), noe som gjør det vanskelig å evaluere de oppnådde resultatene.

Det er en kjent voltammetrisk metode for å bestemme den totale antioksidantaktiviteten ved den relative endringen i strømmen til elektroreduksjon av oksygen i potensialområdet fra 0,0 til -0,6 V (rel. sat. h.s.e.) på en kvikksølvfilmelektrode (pat. 2224997, Russland, IPC 7 G 01 N 33/01. Voltammetrisk metode for å bestemme den totale aktiviteten til antioksidanter / Korotkova E.I., Karbainov Yu.A. - nr. 2002115232/12; søknad 06.06.2002; publ. 27.02.2004). Ulempen med denne metoden er at det oppstår elektrokjemiske sidereaksjoner, som et resultat av at effektiviteten av å bestemme antioksidanter reduseres, noe som fører til en reduksjon i påliteligheten av resultatene.

Det er en kjent metode for å overvåke total AOA av forebyggende og terapeutiske antioksidantmidler ved lipidperoksidasjon til malonaldehyd med spektrofotometrisk eller kjemiluminescensdeteksjon (pat. 2182706, Russland, IPC 7 G 01 N 33/15, 33/52. Metode for overvåking av antioksidantaktivitet av forebyggende og terapeutiske antioksidantfond / Pavlyuchenko I.I., Basov A.A., Fedosov S.R. - nr. 2001101389/14; søknad 01/15/2001; publ. 05/20/2002). Dessuten er antioksidantaktivitet omvendt proporsjonal med nivået av lipidperoksidasjonsprodukter. Ulempen med denne metoden kan betraktes som et begrenset utvalg av analyserte objekter, siden under disse forholdene bare en gruppe antioksidanter bestemmes - lipider.

Det er en kjent metode for å bestemme total AOA av et planteekstrakt, som består i å inkubere ekstraktet med linetol og jern(II)sulfat, initiere en oksidasjonsreaksjon ved UV-bestråling og påfølgende interaksjon med tiobarbitursyre i nærvær av Triton X- 100 (Søknad 97111917/13, Russland, IPC 6 G 01 N 33/00. Metode for å bestemme total antioksidantaktivitet / Rogozhin V.V. - Søknad 07/08/1997; publ. 06/10/1999). Ved utførelse av spektrofotometri brukes en blanding av etanol og kloroform i forholdet 7:3. AOA-verdien til et biologisk materiale bestemmes av forholdet mellom akkumulering av reaksjonsproduktet - malondialdehyd i en prøve som inneholder et ekstrakt og en prøve med en pro-oksidant. Ulempen med denne metoden er muligheten for bivirkninger som oppstår under UV-bestråling, noe som reduserer påliteligheten til de oppnådde analyseresultatene.

De listede metodene for å bestemme total AOA har en rekke ulemper: høy arbeidsintensitet, lav pålitelighet, den målte verdien av total AOA er ikke relatert til og er ikke sammenlignbar med noe generelt akseptert stoff.

Den nærmeste analogen til den patentsøkte oppfinnelsen er en fremgangsmåte for å bestemme total AOA for medisinske planter ved å måle kjemiluminescensen som oppstår under reaksjonen med luminol i nærvær av oksidasjonsmidlet hydrogenperoksid (M.Kh.Navas, A.M.Khiminets, A.G.Azuero Bestemmelse av den reduserende evnen til kanariske frøtinkturer kanarigress ved kjemiluminescensmetode // Journal of Analytical Chemistry. 2004. T.59. No. 1. P.84-86). For å kvantifisere den totale AOA ble den reduserende evnen til ekstraktet av medisinske råvarer og aktiviteten til en potent antioksidant - askorbinsyre i en mengde på 25-110 μg sammenlignet. Sammenlignet med de listede metodene bruker prototypen hydrogenperoksid som et oksidasjonsmiddel, som interagerer med et bredt spekter av antioksidanter, og den målte verdien av objektets totale AOA bestemmes og uttrykkes i forhold til askorbinsyre, som er en generelt akseptert antioksidant, som gjør det mulig å oppnå pålitelige resultater og samtidig opprettholde andre ulemper. Ulempene inkluderer også kompleksiteten til utstyret som brukes i metoden.

Det tekniske formålet med oppfinnelsen er å utvikle en mindre arbeidskrevende og pålitelig metode for å bestemme den totale antioksidantaktiviteten til plantematerialer og matprodukter basert på den.

For å løse det tekniske problemet foreslås det å interagere analytten med reagenset 0,006 M Fe(III) - 0,01 M o-fenantrolin, og askorbinsyre (AA) med samme reagens, som tilsettes i forholdet 1:100 , inkubert i minst 90 minutter, fotometeret ved 510±20 nm, etterfulgt av å fastslå avhengigheten av den analytiske signalverdien av stoffmengden og beregne verdien av total AOA. Spesielt kan beregningen utføres ved å bruke formel (I), utledet fra ligningen for kvantitativ korrespondanse mellom objektet som studeres og askorbinsyre:

hvor a, b er koeffisientene i regresjonsligningen for avhengigheten av det analytiske signalet av mengden AC;

a", b" - koeffisienter i regresjonsligningen for avhengigheten av det analytiske signalet på mengden av objektet som studeres;

x sol - massen av reduksjonsmidlet (prøven) som studeres, mg.

Bruken av det foreslåtte reagenset under de spesifiserte forholdene gjorde det mulig å utvide det lineære området og redusere den nedre grensen for de bestemte mengder askorbinsyre. Det foreslåtte settet med essensielle egenskaper gjør det mulig å bestemme den totale AOA for et bredt spekter av plantematerialer og matprodukter basert på dem.

Den kvantitative korrespondanseligningen forbinder avhengigheten av det analytiske signalet av mengden av askorbinsyre og det analytiske signalets avhengighet av mengden av testobjektet under betingelsen med lik antioksidantaktivitet.

Etter å ha behandlet resultatene av fotometriske målinger av størrelsen på det analytiske signalet ved bruk av minste kvadraters metode (K. Derffel Statistics in analytical chemistry. - M.: "Mir", 1994. P.164-169; A.K. Charykov Matematisk prosessering av resultater av kjemisk analyse - L.: Chemistry, 1984. s. 137-144) ble disse avhengighetene beskrevet av en lineær regresjonsfunksjon: y=ax+b, hvor a er regresjonskoeffisienten, b er frileddet. Koeffisient a i regresjonsligningen er lik tangenten til helningsvinkelen til den rette linjen til x-aksen; koeffisient b - avstanden langs y-aksen fra origo (0,0) til første punkt (x 1, y 1).

Koeffisientene a og b beregnes ved å bruke formlene:

Regresjonsligningen for avhengigheten av AC av mengden askorbinsyre på et gitt tidspunkt har formen:

y AK = a x AK (mg) + b,

regresjonsligning for avhengigheten av AC på mengden av det studerte objektet (reduksjonsmiddel):

y VOST =a" x VOST (mg)+b",

hvor ved AK, ved VOST er den optiske tettheten til den fotometerede løsningen;

x AA (mg), x VOST (mg) - konsentrasjon av askorbinsyre (reduksjonsmiddel) i løsning;

deretter, ved å likestille verdiene til funksjonene, får vi formel (I) for å beregne antioksidantaktiviteten til det studerte objektet i mengdeenheter (mg) askorbinsyre.

Tegningen viser analysesignalets avhengighet av mengden reduksjonsmiddel.

Den optiske tettheten til de analyserte løsningene ble målt ved bruk av et KFK-2MP fotoelektrokolorimeter.

Det er kjent (F. Umland, A. Yasin, D. Tirik, G. Wünsch Complex compounds in analytical chemistry - M.: Mir, 1975. - 531 s.) at o-fenantrolin danner et vannløselig chelat med jern( II) rød-oransje farge, som er karakterisert ved et absorpsjonsmaksimum ved λ=512 nm. Derfor, i den foreslåtte metoden, utføres fotometri ved λ=510±20 nm.

Optimalisering av sammensetningen av reagenset og dens mengde introdusert i reaksjonen ble utført på grunnlag av resultatene av multifaktoriell eksperimentell design ved bruk av "Latin square"-metoden, som besto i å endre alle de studerte faktorene i hvert eksperiment, og hvert nivå av hver faktor forekommer bare én gang med forskjellige nivåer av andre faktorer. Dette lar deg isolere og evaluere effekten forårsaket av hver faktor som studeres separat.

Faktorene var: mengden Fe(III), o-fenantrolin og volumet av reagenset innført i reaksjonen. Kombinasjonen av faktorer bør gi et bredt spekter av linearitet til det analytiske signalet (AS) med tilstrekkelig følsomhet, på den ene siden, og stabilitet av reagenset over tid, på den andre. Dette gjorde det mulig å identifisere følgende nivåer for hver faktor:

mengde Fe(III): 0,003 M (A1); 0,006 M (A2); 0,009 M (A3);

mengde o-fenantrolin: 0,01 M (B 1); 0,02 M (B2); 0,03 M (B3);

reagensvolum: 0,5 ml (C 1); 1,0 ml (C2); 2,0 ml (C3) (tabell 1).

For å velge den optimale kombinasjonen av faktornivåer, oppnådde vi kalibreringsavhengigheter av AC på mengden askorbinsyre i området fra 10 til 150 μg (som er nødvendig for å bekrefte lineariteten til funksjonen), beregnet regresjonsligningen for den oppnådde avhengigheten , og beregnet deretter verdien av AC ved en gitt mengde (120 μg) askorbinsyre. For hver reagenssammensetning (faktorene A, B) ble således volumet (faktor C) hvor AC-verdien er maksimal valgt. Dette tillot oss å redusere antallet kombinasjoner som ble vurdert til ni (tabell 2).

Ved å sammenligne den totale AC for hvert nivå, ble mengdene med maksimalverdi identifisert: ΣA 2 (0,991); ΣB1 (1,066); ΣC2 (1,361). Dette tillot oss å konkludere med at den optimale reagenssammensetningen er: 0,006 M Fe(III) - 0,01 M o-fenantrolin med et volum innført i reaksjonen på 1,0 ml per 100 ml løsning.

Ved den optimale konsentrasjonen av reagenset studerte vi endringen i avhengigheten av AC av konsentrasjonen av askorbinsyre og noen reduksjonsmidler som er vanlige i naturlige gjenstander (tannin, rutin, quercetin) ved forskjellige inkubasjonstider for reaksjonsblandingen (30, 60). , 90, 120 min). Det ble funnet at for alle reduksjonsmidlene som ble studert, er avhengigheten av AC av innholdet lineær i området 10-150 μg (se tegning) og verdien av AC avhenger av inkubasjonstiden (tabell 3).

Det kan sees fra tegningen at endringen i AC under påvirkning av rutin er ubetydelig, tannin nærmer seg, og quercetin overstiger den tilsvarende avhengigheten for askorbinsyre. Når man vurderer endringen i AS avhengig av inkubasjonstiden for alle studerte reduksjonsmidler (tabell 3), ble det funnet at stabilisering av det analytiske signalet over tid observeres fra 90 minutter.

Tabell 3 Endring i AC av reduksjonsmidler over tid
Teststoff	m stoff, mg/cm 3	Analytisk signal
Teststoff	m stoff, mg/cm 3	Inkubasjonstid for reaksjonsblandingen, min
30	60	90	120
Askorbinsyre	10	0,038	0,042	0,044	0,044
100	0,340	0,352	0,360	0,363
Tannin	10	0,029	0,037	0,042	0,043
100	0,280	0,295	0,303	0,308
Rutin	10	0,013	0,016	0,019	0,019
100	0,150	0,166	0,172	0,175
Quercetin	10	0,031	0,044	0,051	0,053
100	0,420	0,431	0,438	0,442

For å bevise den summative karakteren til den bestemte AOA-verdien, ble effekten av Fe (III)-reagenset - o-fenantrolin på modellløsninger, som inkluderte reduksjonsmidler: tannin, rutin, quercetin og askorbinsyre i forskjellige proporsjoner, studert. Tabell 4 viser resultatene av analysen av modellblandinger.

Tabell 4 Resultater av analyse av modellblandinger (P=0,95; n=3)
Antall komponenter i blandingen	Total AOA, beregnet, µgAC	Totalt AOA, funnet, µgAC
introdusert	Total AOA, beregnet, µgAC	Totalt AOA, funnet, µgAC	når det gjelder AK
AK	Tannin	Rutin	Quercetin	AK	Tannin	Rutin	Quercetin
-	20	20	20	-	16,77	9,56	32,73	59,06	57,08
-	10	10	10	-	8,35	4,77	16,41	29,53	26,95
-	50	10	10	-	42,02	4,77	16,41	63,20	55,04
-	10	50	10	-	8,35	23,93	16,41	48,69	50,06
-	10	10	50	-	8,35	4,77	81,70	94,82	91,61
-	30	10	10	-	25,19	4,77	16,41	46,37	39,24
-	10	30	30	-	8,35	14,35	49,06	71,76	73,47
20	20	20	20	20	16,77	9,56	32,73	79,06	96,29
50	10	10	10	50	8,35	4,77	16,41	87,95	93,07
10	50	10	10	10	42,02	4,77	16,41	73,20	78,15
10	10	50	10	10	8,35	23,93	16,41	58,69	78,74
10	10	10	50	10	8,35	4,77	81,70	104,82	121,45
30	30	10	10	30	25,19	4,77	16,41	76,37	84,59
10	10	30	30	10	8,35	14,35	49,06	81,76	103,31

Beregningen av den teoretiske verdien av total AOA ble utført ved bruk av kvantitative korrespondanseligninger som karakteriserer antioksidantkapasiteten til det studerte reduksjonsmidlet i forhold til askorbinsyre, under forhold med lik antioksidantaktivitet: .

Verdien av eksperimentell (funnet) AOA ble beregnet ved å bruke den gjennomsnittlige regresjonsligningen for avhengigheten av AC av mengden askorbinsyre. Fra resultatene presentert i tabell 4 er det klart at de eksperimentelt oppnådde AOA-verdiene er i tilfredsstillende samsvar med de teoretisk beregnede.

Dermed er den bestemte AOA-verdien en oppsummeringsindikator, og bestemmelsen av verdien ved bruk av kvantitative korrespondanseligninger er korrekt.

Den foreslåtte metoden ble testet på ekte prøver. For å bestemme den totale AOA for en ekte prøve eller ekstrakt av den, ble kalibreringsavhengigheter av AC på mengden analytt og askorbinsyre oppnådd med en inkubasjonstid for reaksjonsblandingen på minst 90 minutter. Beregningen av total AOA ble utført i henhold til formel (I) og uttrykt i mg askorbinsyre pr. gram av testobjektet (mgAA/g).

For å bekrefte riktigheten av den foreslåtte metoden, ble disse prøvene testet ved bruk av kjente metoder, ved å vurdere innholdet av askorbinsyre (GOST 24556-89 Bearbeidede produkter av frukt og grønnsaker. Metoder for å bestemme vitamin C) og de dominerende reduksjonsmidlene: tannin i te (GOST 19885-74 Tea. Metoder for å bestemme innhold tannin og koffein), i nyper - mengden organiske syrer (GOST 1994-93 Nyper. Tekniske forhold) (tabell 5).

Antioksidanter (AO)- stoffer som hindrer oksidasjon. I en levende organisme er den ledende faktoren for oksidasjon dannelsen av frie radikaler, derfor anses virkningen av antioksidanter i biologiske systemer først og fremst fra synspunktet om å forhindre oksidasjon av organiske stoffer av frie radikaler.

For tiden er det et stort antall forskjellige metoder for å bestemme antioksidanter: fotometriske, kjemiske, elektrokjemiske, etc. Mange av dem har imidlertid betydelige ulemper som gjør det vanskelig å forstå og videre bruke resultatene som oppnås ved disse metodene. De vanligste ulempene inkluderer følgende:

Kunstige eller ukarakteristiske forhold for biologiske systemer brukes for å måle antioksidanteffekten. For eksempel, i stedet for biologiske frie radikaler, brukes rent kjemiske redoksreaksjoner, eller et stoffs evne til å donere/ta imot elektroner når det utsettes for elektrisk strøm måles. Måleresultatene oppnådd under slike forhold tillater oss ikke å si om stoffet som studeres vil vise den samme "antioksidant"-effekten i kroppen.
Bestemmelse av antioksidanteffekt utføres ved å måle mengden akkumulerte oksidasjonsprodukter (oksidasjonsmarkører). På denne måten er det riktignok mulig å bestemme mengden antioksidant i testprøven, men svært viktig informasjon om aktiviteten til antioksidanten går glipp av. Å ignorere aktiviteten til en antioksidant kan i sin tur føre til betydelige feil ved å bestemme mengden, for eksempel for "svake" antioksidanter som virker sakte, men over lang tid.

Generelt, innen bestemmelse av antioksidanter, er det ingen standardisering som gjør at resultatene oppnådd ved forskjellige metoder kan sammenlignes.

Kjemiluminescerende metode er den mest informative metoden for å studere antioksidanter og har en rekke betydelige fordeler:

Direkte bestemmelse av antioksidanteffekt- den direkte effekten av antioksidanter på frie radikaler er registrert. Den kjemiluminescerende metoden bruker et kjemisk system for å generere frie radikaler, som gir en kontroll kjemiluminescerende glød. En antioksidant tilsettes deretter til et slikt system, som nøytraliserer frie radikaler, noe som fører til undertrykkelse av kontrollkjemiluminescens.
En betydelig fordel med denne tilnærmingen er muligheten for å bruke forskjellige kjemiske systemer for generering av frie radikaler, noe som gjør det mulig å bestemme spesifisiteten til antioksidanter og lokaliseringen av deres virkning ytterligere.
Måling av kvantitative og kvalitative egenskaper til antioksidanter- Den kjemiluminescerende metoden lar deg karakterisere enhver forbindelse som har en antioksidanteffekt med to uavhengige indikatorer:
- Antioksidantkapasitet (AOE)- den totale mengden frie radikaler som kan nøytralisere en forbindelse i en prøve med et visst volum.
- Antioksidantaktivitet (AOA)- hastigheten på nøytralisering av frie radikaler, dvs. antall radikaler nøytralisert per tidsenhet.

Kjemiluminescerende metode gir en viktig forståelse av at effekten av antioksidanter må vurderes ved to indikatorer - kvantitativ (AOE) og kvalitativ (AOA).
Følgende figur viser denne situasjonen:

Effekten av forskjellige antioksidanter på kjemiluminescens
(tallene ved siden av grafene indikerer antioksidantkonsentrasjonen):
til venstre er en "sterk" antioksidant, til høyre er en "svak" antioksidant.

Antioksidanter varierer betydelig i deres aktivitet. Det finnes "sterke" antioksidanter, dvs. Svært aktive antioksidanter som hemmer frie radikaler i høy hastighet og fullstendig undertrykker kjemiluminescens. Slike antioksidanter har maksimal effekt selv ved lave konsentrasjoner og blir raskt konsumert. På den annen side er det «svake» antioksidanter, dvs. Lavpotente antioksidanter som hemmer frie radikaler i lav hastighet og bare delvis hemmer kjemiluminescens. Slike antioksidanter har en betydelig effekt bare i høye konsentrasjoner, men samtidig forbrukes de sakte og virker i lang tid.

Den kjemiluminescerende metoden kan brukes til å bestemme antioksidantindikatorer:

biologiske væsker (plasma, spytt, urin);
farmakologiske legemidler og kosttilskudd;
drikker og mattilsetningsstoffer;
kosmetikk og pleieprodukter;
og så videre.

For å implementere den kjemiluminescerende metoden for å bestemme antioksidanter, anbefales det å bruke følgende utstyr:

Kjemiluminometer Lum-100 - gir termostatering og registrering av kjemiluminescens av 1 prøve.
Kjemiluminometer Lum-1200 - gir temperaturkontroll og samtidig registrering av kjemiluminescens for opptil 12 prøver.

1 Bolshakova L.S. 1Milentyev V.N. 2Sannikov D.P. 3Kazmin V.M. 2

1 Federal State Budgetary Education Institute of Higher Professional Education "Oryol State Institute of Economics and Trade"

2 Federal State Budgetary Institution "Senter for kjemikalisering og landbruksradiologi "Orlovsky"

3 Federal State Budgetary Education Institute of Higher Professional Education "State University - Education, Research and Production Complex"

Muligheten for å bruke kjemiluminescens for å vurdere antioksidantaktiviteten til næringsstoffer ble undersøkt. Den foreslåtte metoden er basert på kjemiluminescens av luminol i et alkalisk medium, hvis intensitet avhenger av mengden peroksider i kjemiluminescensprøven. Kjemiluminescens ble registrert ved bruk av en utviklet installasjon som inneholdt en doseringspumpe, et lystett kammer, en glassvakuumfotomultiplikator og et datasystem. For å øke kjemiluminescens ble en løsning av kaliumjernsulfid tilsatt til luminolen. Endringer i kjemiluminescensintensitet ble registrert i øyeblikket da den analyserte prøven ble introdusert i luminolløsningen. Løvetannekstrakt oppnådd ved tørr lavtemperaturdestillasjon ble brukt som analysert prøve. Den inneholder fenoliske forbindelser kjent for sin høye antioksidantaktivitet. Det er fastslått at kjemiluminescensmetoden kan brukes til å bestemme antioksidantegenskapene til ulike matforbindelser.

Bibliografisk lenke

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentyev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. BRUK AV KJEMILUMINESCENS FOR Å VURDERE ANTIOKSIDANTEGENSKAPER TIL MATstoffer // Rasjonell ernæring, mattilsetningsstoffer og biostimulanter. – 2014. – nr. 6. – S. 36-37;
URL: http://journal-nutrition.ru/ru/article/view?id=283 (tilgangsdato: 17.12.2019). Vi gjør deg oppmerksom på magasiner utgitt av forlaget "Academy of Natural Sciences"

avgangsarbeid

1.4 Antioksidantforskningsmetoder

antioksidantaktivitet er klassifisert: i henhold til metoder for å registrere den manifesterte AOA (volumetrisk, fotometrisk, kjemiluminescerende, fluorescerende, elektrokjemisk); etter type oksidasjonskilde; etter type forbindelse som oksideres; ved metoden for å måle den oksiderte forbindelsen.

Imidlertid er de mest kjente metodene for å bestemme antioksidantaktivitet:

1 TEAC (trolox-ekvivalent antioksidantkapasitet): metoden er basert på følgende reaksjon:

Metmyoglobin + H 2 O 2 > Ferrylglobin + ABTS > ABTS * + AO.

Trolox-ekvivalentmetoden (TEAC) er basert på antioksidanters evne til å redusere 2,2-azinobis radikalkationer (ABTS) og dermed hemme absorpsjon i langbølgelengdeområdet av spekteret (600 nm). En betydelig ulempe med metoden er to-trinns reaksjonen for å produsere radikalen. Dette forlenger analysetiden og kan øke spredningen av resultater, til tross for at et standardisert sett med reagenser brukes til analysen.

2 FRAP (jernreduserende antioksidantkraft): Metoden er basert på følgende reaksjon:

Fe(III)-Tripyriditriazin+AO>Fe(II)-Tripyridyltriazin.

Jernreduserende/antioksidantkapasitet (FRAP). Reaksjonen som brukes her er reduksjonen av Fe(III)-tripyridyltriazin til Fe(II)-tripyridyltriazin. Denne metoden kan imidlertid ikke bestemme bestemmelsen av noen antioksidanter, for eksempel glutation. Denne metoden tillater direkte bestemmelse av lavmolekylære antioksidanter. Ved lav pH er reduksjonen av Fe(III)-tripyridyltriazinkomplekset til Fe(II)-komplekset ledsaget av utseendet til en intens blå farge. Målingene er basert på antioksidanters evne til å undertrykke den oksidative effekten av reaksjonsarter som genereres i reaksjonsblandingen. Denne metoden er enkel, rask og rimelig å implementere.

3 ORAC (oksygen radikal absorbanskapasitet): metoden er basert på følgende reaksjon:

Fe(II)+H2O2 >Fe(III) + OH*+AO>OH* + Luminol.

Bestemmelse av ok(ORAC). I denne metoden registreres fluorescensen til et substrat (fykoerytrin eller fluorescein), som oppstår som et resultat av dets interaksjon med ROS. Hvis testprøven inneholder antioksidanter, observeres en reduksjon i fluorescens sammenlignet med kontrollprøven. Denne metoden ble opprinnelig utviklet av Dr. Guohua Kao ved National Institute on Aging i 1992. I 1996 slo Dr. Kao seg sammen med Dr. Ronald Pryer i en felles gruppe ved USDA Aging Research Center, hvor den halvautomatiserte metoden var opprettet.

4 TRAP (total radikalfangende antioksidantparameter): metoden er basert på følgende reaksjon:

AAPH+AO>AAPH* + PL (FE).

Denne metoden utnytter antioksidantenes evne til å samhandle med peroksylradikalet 2,2-azobis(2-amidinopropan) dihydroklorid (AAPH). TRAP-modifikasjoner består i metoder for å registrere det analytiske signalet. Oftest, i det siste stadiet av analysen, interagerer peroksyradikalet AAPH med et selvlysende (luminol), fluorescerende (diklorfluoresceindiacetat, DCFH-DA) eller annet optisk aktivt substrat.

Det vannløselige vitamin E-derivatet Trolox (6-hydroksy-2,5,7,8-tetrametylkroman-2-karboksysyre) brukes som standard for TEAC-, ORAC- og TRAP-metodene.

Nylig har interessen for bruk av elektrokjemiske metoder økt for å evaluere antioksidantaktivitet. Disse metodene har høy sensitivitet og rask analyse.

Vurderingen av antioksidantaktiviteten til noen matvarer utføres ved hjelp av potensiometrimetoden, basert på bruken av egenskapen til antioksidantstoffer for å delta i redoksreaksjoner på grunn av enol (-OH) og sulfhydryl (-SH) grupper.

Bestemmelse av antioksidantegenskapene til løsninger er basert på den kjemiske interaksjonen mellom antioksidanter og mediatorsystemet, noe som fører til en endring i redokspotensialet. En elektrokjemisk celle er en beholder som inneholder en K-Na-fosfatbufferløsning, et Fe(III)/Fe(II) mediatorsystem og en kompleks elektrode før redokspotensialet måles. Antioksidantaktivitet er vurdert i g-ekv/l.

Den amperometriske metoden for å bestemme antioksidantaktivitet er basert på å måle den elektriske strømmen som oppstår under oksidasjonen av teststoffet på overflaten av arbeidselektroden, som er under et visst potensial. Følsomheten til den amperometriske metoden bestemmes både av arten av arbeidselektroden og potensialet som påføres den. Deteksjonsgrensen for den amperometriske detektoren av polyfenoler og flavonoider er på nano-picogram-nivå; ved så lave konsentrasjoner er det en lavere sannsynlighet for gjensidig påvirkning av forskjellige antioksidanter når de er tilstede sammen, spesielt manifestasjonen av fenomenet synergi. . Ulempene med metoden inkluderer dens spesifisitet: under disse forholdene kan antioksidanter som i seg selv oksideres eller reduseres i området med oksikke analyseres. Fordelene med metoden inkluderer dens hastighet, prostata og følsomhet.

Galvanostatisk kulometrimetode ved bruk av elektrisk genererte oksidanter - metoden er anvendelig for analyse av fettløselige antioksidanter.

Ulike metoder er utviklet for bestemmelse av askorbinsyre:

amperometrisk metode ved bruk av en aluminiumelektrode modifisert med en film av nikkel (II) heksacyanoferrat ved enkel nedsenking i en løsning;

en metode for fastfasespektrofotometrisk og visuell testbestemmelse av askorbinsyre ved bruk av kiselsyrexerogel modifisert med Wawele-reagens og kobber (II) som et indikatorpulver;

kjemiluminescensbestemmelse av askorbinsyre kan utføres ved flow-injeksjonsmetoden ved bruk av kjemiluminescerende reaksjon av rhodamin B med cerium (IV) i et svovelsyremedium.

bestemmelse av askorbinsyre i området 10 -8 -10 -3 g/cm 3 ved anodisk voltammetri i vandige og vandig-organiske medier.

Den vanligste er FRAP-metoden, da den er rask og svært sensitiv. I løpet av de siste tiårene er det utviklet et stort antall varianter av metoder for å bestemme antioksidantaktivitet ved bruk av FRAP-metoden (tabell 1).

Tabell 1 Utvikling av FRAP-metoden og dens anvendelse for å bestemme antioksidantaktiviteten til ulike objekter

	Analyseobjekter	Notater
	Blodplasma	t=4 min. Reaksjonsstøkiometrien og additiviteten ble studert.
	Te, vin	Bestemmelse av AOA på grunn av polyfenoler
		AOA-verdier for forskjellige tevarianter ble sammenlignet
Pulido, Bravo, Saura-Calixto	Modellløsninger	t=30 min. Påvirkningen av et ikke-vandig løsningsmiddel ble avslørt
	Planter
	Blod, vev	PIA-metoden. Påvirkningen av fremmede stoffer er testet.
Firuzi, Lacanna, Petrucci e.a.	Modellløsninger	Følsomheten for bestemmelse av forskjellige AO-er ble studert som en funksjon av deres struktur og redokspotensial.
Katalinic, Milos,	Ulike viner
Temerdashev, Tsyupko og andre.	Modellblandinger
Loginova, Konovalova	Medisiner Medisiner	Testmetode
Temerdashev, Tsyupko og andre.	Tørre rødviner	Korrelasjon av AOA med andre indikatorer på vinkvalitet
Fortsettelse av tabell 1
	Modellblandinger	Følsomheten ved å bestemme forskjellige AO-er ble studert
Vershinin, Vlasova, Tsyupko	Modellblandinger	Signalet ble funnet å være ikke-additivt når det var mangel på oksidasjonsmiddel
Anisimovich, Deineka og andre.	Modellløsninger	Kinetiske parametere for vurdering av AOA er foreslått.

Merknader: Konvensjonelt betegnet: FIA-flow injeksjonsanalyse, TPTZ-tripyridyltriazin, DIP-2,2,-dipyridyl, PHEN-o-fenantrolin, DPA-pyridindikarboksylsyre, FZ-ferrozin, AA-askorbinsyre, CT-katekol, t - eksponeringstid, min.

Interaksjon mellom proteiner og polyelektrolytter i vandige løsninger

Ulike analytiske metoder brukes for å karakterisere protein-polyelektrolyttkomplekser. Instrumentelle metoder gir informasjon om strukturelle og optiske egenskaper, og bestemmer også dynamikken og naturen til PEC-binding ...

Effekt av d-metallforbindelser på dissosiasjonshastigheten til et vannmolekyl i en bipolar membran

I prosessen med å syntetisere nye BPM-er, bør mye oppmerksomhet rettes mot å studere egenskapene til de oppnådde prøvene for det påfølgende utvalget av synteseforhold som sikrer forbedring av de elektrokjemiske egenskapene til de syntetiserte membranene ...

Designer narkotika og syntetiske cannabinoider

Påvisning av syntetiske cannabinoider i planteblandinger kan utføres ved forskjellige fysisk-kjemiske metoder, som kromatografi-massespektrometri, gasskromatografi, tynnsjiktskromatografi og høyytelses væskekromatografi...

Utvikling av en metode for å bestemme flavonoider i medisinske plantematerialer

Syntese og farmakologiske egenskaper av kinolinoner-2

Studieobjekt: Kinolinon-2. Forskningsmetode: Ved hjelp av dataprogrammet "Marvin JS" ble strukturen til stoffet opprettet. Deretter ble hun sendt til nettstedet "http://www.way2drug.com/PASSOnline/predict.php" for videre forskning...

Termisk spektral metode for å studereer

Teknologi for å produsere høyrenset kitosan fra skall fra krepsdyr

Bestemmelse av molekylvekten til kitosan Molekylvekten til kitosan ble bestemt viskometrisk ved bruk av en standardmetode. Løsninger med konsentrasjon 0,05 og 0,5 g/dL ble fremstilt ved å løse opp en prøve av polymerpulver i acetatbuffer (0...

Fysiografiske kjennetegn ved naturparkens territorium

Nøkkelord

frie radikaler/antioksidant/ antioksidant aktivitet / total antioksidantkapasitet / kjemiluminescens/ luminol / frie radikaler / antioksidant / antioksidantaktivitet / total antioksidantkapasitet / kjemiluminescens / luminol

merknad vitenskapelig artikkel om kjemiske vitenskaper, forfatter av det vitenskapelige arbeidet - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

Medisinske plantematerialer er en av kildene til antioksidanter for menneskekroppen. Blant metodene for å bestemme innholdet av antioksidanter i planteobjekter, er metoden for kjemiluminescensanalyse utbredt. I dette arbeidet ble det brukt til å estimere total antioksidantkapasitet(OAE) avkok av rognefrukter, nyper og hagtorn og infusjon av bringebærfrukter. Kinetikken ble registrert i eksperimentet kjemiluminescens i et system bestående av pepperrotperoksidase, hydrogenperoksid og luminol. Konsentrasjonene og volumet av systemkomponenter i prøven ble valgt slik at sterke antioksidanter (askorbinsyre) og moderate antioksidanter (quercetin) ble fullstendig oksidert i løpet av måletiden (10 min). En metode for beregning av OAE basert på endringer i lett sum foreslås og begrunnes kjemiluminescens i nærvær av planteprøver. Kinetikkanalyse kjemiluminescens viste at de studerte objektene var dominert av middels sterke antioksidanter, inkludert flavonoider, og svake antioksidanter (tokoferol, etc.). En sammenligning av de beregnede OAE-verdiene for de studerte objektene og dataene fra deres kjemiske analyse viste at produkter som inneholder samme mengde antioksidanter med forskjellige forhold etter type kan variere i deres evne til å beskytte kroppen mot de skadelige effektene av frie radikaler . Den beskrevne teknikken er lovende for å studere planteobjekter som inneholder en blanding av antioksidanter av ulike typer.

relaterte temaer vitenskapelige arbeider innen kjemiske vitenskaper, forfatter av det vitenskapelige arbeidet - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu. Izmailov, Yu. A. Vladimirov

2016 / Georgiy Vladimirov, Sergunova E.V., Izmaylov D.Yu., Vladimirov Yu.A.
Bestemmelse av antioksidanter ved aktivert kjemiluminescens ved bruk av 2,2"-azo-bis(2-amidinopropan)
2012 / Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.
Antioksidanteffekt av dihydroquercetin og rutin i peroksidasereaksjoner katalysert av cytokrom c
2008 / Demin E.M., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A.
Vurdering av den oksidative og antioksidantkapasiteten til biologiske substrater ved kjemiluminescens indusert av Fenton-reaksjonen
2016 / Piskarev Igor Mikhailovich, I.P. Ivanova
Bestemmelse av innholdet av lipohydroperoksider i serumlipoproteiner ved bruk av mikroperoksidase-luminol-systemet
2011 / Teselkin Yuri Olegovich, Babenkova Irina Vladimirovna
Antioksidantforskningsmetoder
2004 / Khasanov V.V., Ryzhova G.L., Maltseva E.V.
Antioksidantaktivitet av planter brukt i etnomedisin av Tuva
2012 / Chekhani N.R., Teselkin Yu.O., Pavlova L.A., Kozin S.V., Lyubitsky O.B.
Studie av antioksidantegenskapene til Fosprenil i ulike biologiske testsystemer
2017 / A. V. Sanin, A. N. Narovlyansky, A. V. Pronin, T. N. Kozhevnikova, V. Yu. Sanina, A. D. Agafonova
Påvirkningen av ulike doser av polyklorerte bifenyler på tilstanden til spontan og immunglobulin-indusert luminolavhengig kjemiluminescens av fullblod
2016 / Gabdulkhakova I.R., Kayumova A.F., Samokhodova O.V.
Evaluering av lipidperoksidasjonssystemet for antioksidantbeskyttelse hos barn med essensiell arteriell hypertensjon ved bruk av spektrofotometri og kjemiluminescensmetoder
2014 / Natyaganova Larisa Viktorovna, Gavrilova Oksana Aleksandrovna, Kolesnikova Larisa Romanovna

Kjemiluminescensbestemmelse av total antioksidantkapasitet i medisinsk plantemateriale

Medisinsk plantemateriale er en av kildene til antioksidanter for menneskekroppen. Kjemiluminescensanalyse er en av de vanlige metodene for å bestemme innholdet av antioksidanter i plantematerialer. I vårt arbeid ble kjemiluminescensanalyse brukt for å bestemme den totale antioksidantkapasiteten (TAC) til fruktavkok av fjellaske, rose og hagtorn, samt bringebærfruktinfusjon. Eksperimenter etablerte kinetikken til kjemiluminescensen til et system bestående av pepperrotperoksidase, hydrogenperoksid og luminol. Konsentrasjoner og volumer av komponenter i systemet ble valgt slik at sterke antioksidanter (askorbinsyre) og antioksidanter med gjennomsnittlig kraft (quercetin) ble fullstendig oksidert under målingen (10 minutter). En metode for TAC-beregning basert på endringer i kjemiluminescenslyssum i nærvær av planteprøver ble foreslått og begrunnet. Analyse av kjemiluminescenskinetikk viste at antioksidanter med gjennomsnittlig kraft dominerer i de studerte objektene, inkludert flavonoider og svake antioksidanter (tokoferol og andre). Sammenligning av de beregnede TAC-verdiene for objektene som er undersøkt og deres kjemiske analysedata viste at produkter som inneholder samme mengde antioksidanter med forskjellige forhold mellom antioksidanter etter type kan variere i deres evne til å beskytte kroppen mot de skadelige effektene av frie radikaler . Den beskrevne teknikken er lovende for studiet av planteobjekter som inneholder en blanding av forskjellige typer antioksidanter.

Tekst av vitenskapelig arbeid om emnet "Kjemiluminescerende metode for å bestemme den totale antioksidantkapasiteten i medisinske plantematerialer"

kjemiluminescerende metode for å bestemme den totale antioksidantkapasiteten i medisinske plantematerialer

G. K. Vladimirov1^, E.V. Sergunova2, D. Yu. Izmailov1, Yu. A. Vladimirov1

1 Institutt for medisinsk biofysikk, Fakultet for grunnleggende medisin, M.V. Lomonosov Moscow State University, Moskva

2 Institutt for farmakognosi, Farmasøytisk fakultet,

Det første Moscow State Medical University oppkalt etter I.M. Sechenov, Moskva

Medisinske plantematerialer er en av kildene til antioksidanter for menneskekroppen. Blant metodene for å bestemme innholdet av antioksidanter i planteobjekter, er metoden for kjemiluminescensanalyse utbredt. I dette arbeidet ble det brukt til å vurdere den totale antioksidantkapasiteten (TAC) av avkok av rogn-, nype- og hagtornfrukter og infusjon av bringebærfrukter. I eksperimentet ble kinetikken til kjemiluminescens registrert i et system bestående av pepperrotperoksidase, hydrogenperoksid og luminol. Konsentrasjonene og volumet av systemkomponenter i prøven ble valgt slik at sterke antioksidanter (askorbinsyre) og moderate antioksidanter (quercetin) ble fullstendig oksidert i løpet av måletiden (10 min). En metode for å beregne OAE basert på endringer i lyssummen av kjemiluminescens i nærvær av planteprøver er foreslått og begrunnet. Analyse av kjemiluminescenskinetikk viste at middels sterke antioksidanter, inkludert flavonoider, og svake antioksidanter (tokoferol, etc.) dominerer i de studerte objektene. En sammenligning av de beregnede OAE-verdiene for de studerte objektene og dataene fra deres kjemiske analyse viste at produkter som inneholder samme mengde antioksidanter med forskjellige forhold etter type kan variere i deres evne til å beskytte kroppen mot de skadelige effektene av frie radikaler . Den beskrevne teknikken er lovende for å studere planteobjekter som inneholder en blanding av antioksidanter av ulike typer.

Stikkord: frie radikaler, antioksidant, antioksidantaktivitet, total antioksidantkapasitet, kjemiluminescens, luminol

Finansiering: arbeidet ble støttet av Russian Science Foundation, stipend nr. 14-15-00375.

Ex3 For korrespondanse: Georgy Konstantinovich Vladimirov

119192, Moskva, Lomonosovsky pr-t, 31, bygning 5; [e-postbeskyttet]

Artikkel mottatt: 03/10/2016 Artikkel akseptert for publisering: 18/03/2016

kjemiluminescensbestemmelse av total antioksidantkapasitet i medisinsk plantemateriale

1 Institutt for medisinsk biofysikk, Fakultet for grunnleggende medisin, Lomonosov Moscow State University, Moskva, Russland

2 Institutt for farmakognosi, Farmasøytisk fakultet,

Det første Sechenov Moscow State Medical University, Moskva, Russland

Nøkkelord: frie radikaler, antioksidant, antioksidantaktivitet, total antioksidantkapasitet, kjemiluminescens, luminol

Finansiering: dette arbeidet ble støttet av Russian Science Foundation, stipend nr. 14-15-00375.

Anerkjennelser: forfattere takker Andrey Alekseev fra Lomonosov Moscow State University for hans hjelp til å gjennomføre eksperimentet. Korrespondanse bør adresseres: Georgiy Vladimirov

Lomonosovskiy prospekt, d. 31, k. 5, Moskva, Russland, 119192; ur [e-postbeskyttet] Mottatt: 03/10/2016 Godtatt: 18/03/2016

Frie radikaler dannet i kroppen forstyrrer strukturen til cellemembraner, som igjen fører til utvikling av ulike patologiske tilstander. De destruktive oksidative effektene av radikaler forhindres av kroppens antioksidantforsvarssystem, der lavmolekylære forbindelser – radikale avskjærere (feller) – spiller en viktig rolle. En av kildene til antioksidanter er medisinske plantematerialer, samt medisiner basert på dem, hvor studiet av antioksidantpotensialet bidrar til å øke deres forebyggende og terapeutiske effekt.

Hovedmetodene for å bestemme antioksidanter diskuteres i verkene, men definisjonen av antioksidanter som kjemiske forbindelser gir ikke et fullstendig bilde av de beskyttende egenskapene til objektet som studeres: de bestemmes ikke bare av mengden av en bestemt antioksidant, men også av aktiviteten til hver av dem. Antioksidantaktivitet, eller antioksidantaktivitet, AOA, er hastighetskonstanten for reaksjonen til en antioksidant med et fritt radikal (kInH). Kjemiluminescensmetoden (CL) gjør det mulig å bestemme den totale mengden radikaler som binder antioksidanter i en prøve (total antioksidantkapasitet, TCA), og ved bruk av metoden for matematisk modellering av CL-kinetikk, også dannelses- og reaksjonshastigheten til radikaler med antioksidanter, det vil si AOA.

Den vanligste modifikasjonen av kjemiluminescensmetoden for å bestemme total antioksidantkapasitet er basert på bruken av luminol som en kjemiluminescensaktivator. En prøve med tilsetning av luminol, hydrogenperoksid og en forbindelse som er i stand til å danne radikaler som et resultat av spontan dekomponering (termolyse), for eksempel 2,2"-azobis-(2-amidinopropan) dihydroklorid (ABAP):

I nærvær av molekylært oksygen danner alkylradikalet R^ peroksylradikalet ROO^:

ROO^ + LH2 ^ ROOH + LHv Fra LH, gjennom dannelsen av mellomliggende stoffer (luminolhydroperoksid og luminolendoperoksid), dannes et molekyl av sluttproduktet av luminoloksidasjon, aminoftalsyre, i en elektronisk eksitert tilstand, som sender ut et foton , og som et resultat observeres kjemiluminescens . CL-intensiteten er proporsjonal med hastigheten på fotonproduksjonen, og den er på sin side proporsjonal med den stasjonære konsentrasjonen av LH i systemet. Ved å samhandle med radikaler, avbryter antioksidanter den beskrevne kjeden av transformasjoner og forhindrer dannelsen av et foton.

Forbindelser som er følsomme for termolyse er ikke den eneste mulige kilden til radikaler når man analyserer antioksidantkapasiteten til en prøve ved bruk av kjemiluminescensmetoden. Alternativer er pepperrotperoksidase-hydrogenperoksid, hemin-hydrogenperoksid, cytokrom c-kardiolipin-hydrogenperoksid, etc. Reaksjonsskjemaet for oksidasjon av luminol med peroksidaser er diskutert i arbeidet til Cormier et al. .

De kinetiske CL-kurvene for disse systemene gjenspeiler to stadier av reaksjonen: stadiet med økende CL-intensitet og stadiet av et platå eller gradvis nedgang i luminescens, når

CL-intensiteten er enten konstant eller sakte avtar. Arbeidet beskriver to tilnærminger for å måle total antioksidantkapasitet som tar hensyn til denne egenskapen til kurvene. TRAP-metoden (Total Reactive Antioxidant Potential) er basert på å måle den latente perioden av CL t og kan brukes til å bestemme antioksidanter som Trolox eller askorbinsyre: de er karakterisert ved en høy reaksjonshastighetskonstant med radikaler og kan av denne grunn være kalt sterke antioksidanter. I løpet av den latente perioden oppstår deres fullstendige oksidasjon. TAR-metoden (Total Antioxidant Reactivity) brukes til å måle graden av kjemiluminescensslukking q på platået eller maksimum av kjemiluminescenskurven:

hvor I er kjemiluminescensintensiteten uten en antioksidant, og 11 er CL-intensiteten i nærvær av en antioksidant. Denne metoden brukes hvis systemet inneholder overveiende svake antioksidanter med lave hastighetskonstanter for interaksjon med radikaler - mye lavere sammenlignet med konstanten til luminol.

Effekten av antioksidanter er ikke bare preget av indikatorene t og c. Som det fremgår av arbeidene, er effekten av antioksidanter som urinsyre i hemin-H2O2-luminol-systemet eller tokoferol, rutin og quercetin i cytokrom c-kardiolipin-H2O2-luminol-systemet preget av en endring i maksimalhastigheten av økning i CL (utx). Som resultatene av matematisk modellering av kinetikk viser, er verdiene av hastighetskonstantene for interaksjon av disse antioksidantene med radikaler nær verdien av luminolkonstanten, derfor kan slike antioksidanter kalles antioksidanter med middels styrke.

Hvis materialet som studeres, spesielt planteråvarer, bare inneholdt én type antioksidanter, kan innholdet deres karakteriseres av en av de tre indikatorene som er oppført ovenfor (t, c eller V). Men plantematerialer inneholder en blanding av antioksidanter av ulik styrke. For å løse dette problemet brukte noen forfattere endringen i lyssummen av kjemiluminescens over en viss tid DE, beregnet med formelen

DE = DE0 - DE,

hvor DE0 og DE5 er CL lys summene for en gitt tid? i henholdsvis kontroll- og testprøvene. Tiden må være tilstrekkelig for oksidasjon av alle antioksidanter i systemet, det vil si at CL-kurven til testprøven når nivået til CL-kurven til kontrollprøven. Sistnevnte antar at forskere ikke bare må registrere lyssummen av gløden, men også registrere CL-kinetikkkurven i tilstrekkelig lang tid, noe som ikke alltid gjøres.

Siden alle målte parametere avhenger av enheten og måleforholdene, sammenlignes vanligvis antioksidanteffekten til stoffet i systemet som studeres med effekten av en standard antioksidant, for eksempel Trolox.

Pepperrotperoksidase-hydrogenperoksidsystemet har blitt brukt til å analysere den totale antioksidantkapasiteten til plantematerialer av mange forfattere. For å estimere mengden antioksidanter i prøver ble den latente perioden til CL (TRAP-metoden) brukt, og området under CL-utviklingskurven ble brukt i arbeidene. De listede verkene gir imidlertid ingen klar begrunnelse

valget av en eller annen parameter for vurdering av OAU.

Hensikten med studien var å finne ut hvordan forholdet mellom ulike typer antioksidanter påvirker TOA, og å modifisere kjemiluminescensmetoden på en slik måte at man kan bestemme TOA mer nøyaktig i plantematerialer. For å gjøre dette satte vi oss flere oppgaver. Sammenlign først CL-kinetikken til de studerte objektene med kinetikken til standard antioksidanter av tre typer (sterke, middels og svake) for å forstå hvilken type antioksidanter som utgjør hovedbidraget til OAU for de studerte objektene. For det andre, beregn OAE for objektene som studeres ved å måle reduksjonen i CL-lyssummen under påvirkning av disse objektene sammenlignet med effekten av antioksidanten som gir det største bidraget til OAE.

MATERIALER OG METODER

Formålet med studien var industrielle prøver av hagtorn, rogn og nyper produsert av JSC Krasnogorskleksredstva (Russland), samt bringebærfrukter samlet av forfatterne i Moskva-regionen under naturlige vekstforhold og tørket ved en temperatur på 60-80 ° C til de sluttet å frigjøre juice og deformasjon når de ble presset.

Reagensene for å analysere antioksidantkapasiteten ved bruk av kjemiluminescensmetoden var: KH2PO4, 20 mM bufferløsning (pH 7,4); peroksidase fra pepperrotrøtter (aktivitet 112 enheter/mg, M = 44.173,9), 1 mM vandig løsning; luminol (5-amino-1,2,3,4-tetrahydro-1,4-ftalazindion, 3-aminoftalsyrehydrazid, M = 177,11), 1 mM vandig løsning; hydrogenperoksid (H2O2, M = 34,01), 1 mM vandig løsning; løsninger av antioksidanter (askorbinsyre, quercetin, tokoferol). Alle reagenser er produsert av Sigma Aldrich (USA).

Avkok av hagtorn-, rogne- og nypefrukter og en infusjon av bringebærfrukter ble tilberedt i henhold til metodene til USSR State Pharmacopoeia, angitt i den generelle farmakopéartikkelen "Infusjoner og avkok".

Bestemmelsen av total antioksidantkapasitet ble utført ved å registrere kjemiluminescens på et Lum-100 kjemiluminometer (DISoft, Russland) ved bruk av PowerGraph 3.3-programvare. For å bestemme OAE i plantematerialer, 40 μl luminol i en konsentrasjon på 1 mM, 40 μl pepperrotperoksidase ved en konsentrasjon på 0,1 μM, fra 10 til 50 μl avkok eller infusjon (avhengig av konsentrasjonen) og fosfatbuffer i nødvendig mengde ble plassert i kyvetten til anordningen for å bringe det totale prøvevolumet til 1 ml. Kyvetten ble installert i enheten og CL ble registrert, og observerte bakgrunnssignalet. Etter 48 s med opptak av bakgrunnssignalet ble 100 μl H2O2 i en konsentrasjon på 1 mM tilsatt til kyvetten og CL-registreringen ble fortsatt i 10 min. Det ble utarbeidet fire prøver med forskjellige konsentrasjoner av hvert planteobjekt. CL ble også registrert for løsninger av askorbinsyre, quercetin og tokoferol i fem forskjellige konsentrasjoner for hver av antioksidantene. Deretter ble OAU for prøvene av avkok og infusjoner beregnet på nytt til quercetin.

Konsentrasjonene av luminol, pepperrotperoksidase og hydrogenperoksid ble valgt for å bestemme antioksidantkapasiteten til vandige ekstrakter fra medisinske plantematerialer innen en akseptabel tid (ikke mer enn 10 minutter). I løpet av denne tiden kurver kjemiluminescens for antioksidantene askorbat og flavonoidet quercetin (de viktigste antioksidantene i plantematerialer)

nådde et platå, noe som indikerer fullstendig ødeleggelse av antioksidanter i systemet. Fortynninger av de studerte prøvene og konsentrasjoner av løsninger av standard antioksidanter (angitt i bildetekstene til figurene) ble valgt på en slik måte at alle CL kinetiske kurver ble målt med samme følsomhet som enheten.

Antioksidantkapasitet ble beregnet fra endringen i arealet (AS) under den kinetiske kurven for kjemiluminescens (lyssum) ved tilsetning av et stoff som inneholder en antioksidant. For å gjøre dette beregnet vi S0 for et system uten antioksidant og trakk fra det området SS, som karakteriserer systemet som antioksidanten ble tilsatt til. Verdien av AS avhenger av sensitiviteten til kjemiluminometeret og måleforholdene. Forholdet AS/C ■ V (der C er konsentrasjonen av det biologiske materialet som studeres i kyvetten, g/l, og V er volumet av kyvetten, l) uttrykker antioksidantkapasiteten til 1 g av det studerte materialet, dvs. planteråvarer.

På lignende måte beregnet vi antioksidantkapasiteten ASa til en løsning av en standard antioksidant, for eksempel quercetin, plassert i samme volum av reaksjonsblandingen. Forholdet AS/CÄ ■ V (der CA er vektkonsentrasjonen av antioksidanten i kyvetten, g/l) uttrykker antioksidantkapasiteten til 1 g antioksidant.

For hver av standard antioksidantene ble signalet fra løsninger med flere konsentrasjoner registrert for å sikre at beregningene var innenfor et lineært forhold og at resultatene som ble oppnådd var reproduserbare. Faktisk ble en lineær avhengighet (ASa = kA ■ CA) av signalet på konsentrasjonen oppnådd, fra hvilken den støkiometriske koeffisienten kA ble beregnet. I henhold til Fisher-kriteriet er kA-verdiene oppnådd for standard antioksidanter statistisk signifikante med en sannsynlighet på 0,975. Deretter ble signalet fra fire konsentrasjoner registrert for hver av de fire planteprøvene, og for alle prøvene ble det oppnådd en lineær avhengighet av signalet på konsentrasjonen (AS = k ■ C), hvorfra den støkiometriske koeffisienten k ble beregnet. Med en sannsynlighet på 0,975 (Fishers test) er k-verdiene oppnådd for planteprøver statistisk signifikante. Den totale antioksidantkapasiteten til plantemateriale i form av massen til standard antioksidant (mg%) ble funnet ved å bruke formelen

OAE = k ■ 105. k

Verdier ble presentert som aritmetisk gjennomsnitt ± standardavvik (M ± 5) ved p<0,05.

FORSKNINGSRESULTATER

En studie av kinetikken til kjemiluminescens i nærvær av natriumaskorbat (fig. 1) viste at denne antioksidanten er preget av en latent periode når CL er nesten fullstendig undertrykt. Dens varighet er proporsjonal med mengden antioksidant i systemet. I dette tilfellet endres verken helningen til CL-kurvene eller CL-intensiteten på platået. Dette forklares med at askorbinsyre er en sterk antioksidant som fanger opp alle radikaler som dannes i systemet, inkludert luminolradikaler, og CL utvikles ikke før alt askorbat er oksidert.

Effekten av tokoferol (fig. 2) ble manifestert ved en reduksjon i CL-intensiteten på platået, som er typisk for svake antioksidanter, selv om tokoferol regnes som en av de mest

kraftige antioksidanter. Kanskje dette avviket skyldes det faktum at i vårt eksperiment var frie radikaler i en vandig løsning, mens effekten av tokoferol vanligvis studeres i ikke-polare medier. I en studie der kilden til radikaler var et kompleks av cytokrom c med kardiolipin og reaksjonen med luminol fant sted innenfor dette komplekset, hadde tokoferol egenskapene til en middels sterk antioksidant.

Etter å ha studert effekten av ulike konsentrasjoner av quercetin på systemet vårt (fig. 3) og sammenlignet de kinetiske kurvene for det og natriumaskorbat og tokoferol, kan det bemerkes at hovedeffekten av quercetin manifesteres i en endring i helningen til kurver, dvs. utviklingshastigheten av CL, som er typisk for middels sterke antioksidanter.

CL-kurvene for alle de studerte avkokene (fig. 4) ligner kurvene for quercetin med en liten reduksjon i CL-intensiteten på slutten, dvs. når man når

Tid, min

Ris. 1. Effekt av natriumaskorbat på kjemiluminescenskinetikk

Konsentrasjoner av systemkomponenter: luminol - 40 µM, pepperrotperoksidase - 4 nM, hydrogenperoksid - 100 µM. Kurver: 1 - kontrollprøve; 2 - 0,05 uM; 3 - 0,10 uM; 4 - 0,15 uM; 5 - 0,2 uM; 6 - 0,25 µM natriumaskorbat.

platå. Som vist i arbeidet, er denne oppførselen typisk for antioksidanter med middels styrke, som i vårt tilfelle inkluderer polyfenoler - flavonoider og tanniner. For infusjon av bringebærfrukter (fig. 4, D) er det en merkbar nedgang i kjemiluminescens på platånivået, som er typisk for svake antioksidanter, som i dette tilfellet er tokoferol. Når det gjelder quercetin og tokoferol, inneholder bringebærinfusjonen 4,7 ± 0,9 µmol/g quercetin og 11,9 ± 0,8 µmol/g tokoferol.

Ved sammenligning av kjemiluminescenskurver oppnådd for forskjellige konsentrasjoner av de fire studerte vandige ekstraktene fra plantematerialer, ble det vist at bidraget fra middels og svake antioksidanter til prøvenes totale antioksidantkapasitet ble redusert i følgende serier: bringebærfruktinfusjon (fig. 4) , D), nypeavkok (fig. 4, B), avkok av rognefrukter (fig. 4, A), avkok av hagtornfrukter (fig. 4, B). AS-verdiene basert på konsentrasjonen C av det studerte stoffet i kyvetten og verdiene for den totale antioksidantkapasiteten i form av quercetin er gitt i tabellen.

DISKUSJONEN AV RESULTATENE

Dataene oppnådd under eksperimentene og OAE-verdiene til de studerte objektene beregnet på grunnlag av dem ble sammenlignet med innholdet av de viktigste antioksidantene i dem, bestemt ved hjelp av kjemiske analysemetoder. Til tross for at den positive korrelasjonen mellom den totale mengden antioksidanter og TAU i forskjellige objekter er ubestridelig, er det fortsatt merkbare forskjeller mellom disse indikatorene. For eksempel, hvis vi tar summen av innholdet av flavonoider, tanniner og askorbinsyre, så viser det seg å være større enn den beregnede TAU for alle studerte objekter, bortsett fra avkok av hagtornfrukter (tabell).

Andre forskere har også vist at resultatene av kjemisk analyse og TAU-verdien bestemt ved kjemiluminescensmetoden ofte ikke er sammenfallende. I drift bestemmes den totale antioksidantkapasiteten

46 Tid, min

Jeg" "h chi----.

Ris. 2. Effekt av tokoferol på kjemiluminescenskinetikk

Konsentrasjoner av systemkomponenter: luminol - 40 µM, pepperrotperoksidase - 4 nM, hydrogenperoksid - 100 µM. Kurver: 1 - kontrollprøve; 2 - 0,01 uM; 3 - 0,025 uM; 4 - 0,06 uM; 5 - 0,1 uM; 6 - 0,2 uM tokoferol.

46 Tid, min

Ris. 3. Effekt av quercetin på kinetikken til kjemiluminescens Konsentrasjoner av systemkomponenter: luminol - 40 µM, pepperrotperoksidase - 4 nM, hydrogenperoksid - 100 µM. Kurver: 1 - kontrollprøve; 2 - 0,02 uM; 3 - 0,03 uM; 4 - 0,04 uM; 5 - 0,05 uM; 6 - 0,06 µM quercetin.

Tid, min

46 Tid, min

120 I 100 80\60 40 20

46 Tid, min

Ris. 4. Effekt av avkok av rognefrukt (A), hagtorn (B), nyper (C) og infusjon av bringebærfrukt (D) på kinetikken til kjemiluminescens Konsentrasjoner av systemkomponenter: luminol - 40 µM, pepperrotperoksidase - 4 nM, hydrogenperoksid - 100 uM. (A) Kurver: 1 - kontrollprøve; 2 - 0,002 g/l; 3 - 0,004 g/l; 4 - 0,006 g/l; 5 - 0,008 g/l avkok av rognefrukter. (B) Kurver: 1 - kontrollprøve; 2 - 0,005 g/l; 3 - 0,0075 g/l; 4 - 0,01 g/l; 5 - 0,0125 g/l avkok av hagtornfrukter. (B) Kurver: 1 - kontrollprøve; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,0015 g/l; 4 - 0,002 g/l; 5 - 0,0025 g/l nypeavkok. (D) Kurver: 1 - kontrollprøve; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,003 g/l; 4 - 0,004 g/l; 5 - 0,005 g/l infusjon av bringebærfrukter.

i peroksidase-luminol-hydrogenperoksid-systemet korrelert med innholdet av triterpenforbindelser. Men i arbeidet til de samme forfatterne, der studieobjektet var en annen plante, observerte de ikke en korrelasjon av OAE med innholdet av noen gruppe stoffer, inkludert flavonoider.

Slike avvik er assosiert med minst tre faktorer. For det første er aktiviteten til antioksidanter viktig, dvs. hastigheten på deres interaksjon med radikaler, som er forskjellig for forskjellige antioksidanter inkludert i planteprøven. I følge Izmailov korrelerer hastighetskonstantene til de tilsvarende reaksjonene for mexidol, tokoferol og quercetin som 0,04: 2: 60. For det andre kan hvert antioksidantmolekyl, som går inn i en kjemisk reaksjon, fange opp et annet antall radikaler. I følge arbeidet fanget quercetin, urinsyre og askorbinsyrer opp henholdsvis 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 og 0,5 ± 0,2 radikaler per reagert antioksidantmolekyl (hemin-H2O2-luminol-systemet ble brukt). For det tredje kan resultatene av studien påvirkes av tilstedeværelsen av peroksidaseaktivitet i selve planteprøvene, som i arbeidet, samt tilstedeværelsen av kalsium i prøvene, som, som vist i arbeidet, er i stand til å øke aktiviteten til pepperrotperoksidase under visse forhold. Dette fører vanligvis til mer

høyere CL-intensitet på platået enn på kontrollkurvene, som vi imidlertid ikke observerte.

Den første faktoren begrenser kraftig bruken av en slik parameter som en endring i lyssummen, siden tiden for måling av kjemiluminescens må være lengre enn tiden for forbruket av alle antioksidanter i testprøven. Forekomsten av dette øyeblikket kan bare bedømmes ved å måle kinetikken til kjemiluminescens. I tillegg er bidraget fra svake antioksidanter til OAU kraftig undervurdert, siden tiden for deres fullstendige oksidasjon er mange ganger lengre enn den akseptable målevarigheten (10-20 min).

Den støkiometriske koeffisienten til antioksidanten er enda viktigere. Antall radikaler n fanget opp av den er lik

hvor p er den støkiometriske koeffisienten, og Am er endringen i konsentrasjonen av antioksidanten i løpet av måletiden, i vårt tilfelle den initiale konsentrasjonen av teststoffet i testprøven.

Forskjellen i lyssummen av luminescensen i fravær av antioksidanten og i dens nærvær er proporsjonal med n. Det totale antallet avskjærte radikaler er lik n = Y.p. m,

hvor er den støkiometriske koeffisienten til en bestemt antioksidant, og m er dens konsentrasjon under måling

Studieobjekt Flavonoider, mg%* Tanniner, mg%* Askorbinsyre, mg%* AS/C ■ 10-8, arb. enheter TAU, mg% quercetin

Rognefruktavkok 8,87 ± 0,01 210,00 ± 10,00 0,67 ± 0,02 7,13 ± 0,96 56,53 ± 7,61

Nypeavkok 4,66 ± 0,04 850,00 ± 20,00 3,70 ± 0,12 16,60 ± 3,40 131,63 ± 27,26

Avkok av hagtornfrukt 3,01 ± 0,06 12,00 ± 3,00 0,23 ± 0,002 3,18 ± 0,29 25,20 ± 2,32

Infusjon av tørkede bringebærfrukter 90,00 ± 4,00 40,00 ± 20,00 3,91 ± 0,08 6,65 ± 1,21 52,69 ± 9,56

Merk: * - litteraturdata, . AS - endring i lys sum for prøven, rel. enheter, C - prøvekonsentrasjon i kyvetten, g/l. De beregnede verdiene er pålitelige på s<0,05. Число измерений для каждого образца - четыре.

Rhenia. Det totale antallet avfangede radikaler er absolutt ikke lik den totale mengden antioksidanter, siden pt-koeffisientene ikke bare ikke er lik enhet, men også varierer betydelig for forskjellige antioksidanter.

Verdien av n er proporsjonal med forskjellen i lyssummer målt over en viss tid mellom en prøve som inneholder en antioksidant og en kontrollprøve som ikke inneholder antioksidanter:

hvor k er en koeffisient som er konstant under de samme måleforholdene.

Metoden som er omtalt i artikkelen lar oss bestemme den totale antioksidantkapasiteten, mens kjemisk analyse lar oss bestemme det totale innholdet av antioksidanter i produktet. Derfor ser kjemiluminescensmetoden ut til å være mer informativ enn kjemiske analyser.

Vi valgte betingelsene for å vurdere den totale antioksidantkapasiteten til planteråvarer ved å registrere kinetikken til kjemiluminescens i et system bestående av pepperrotperoksidase, hydrogenperoksid og luminol (komponentkonsentrasjoner - henholdsvis 4 nM, 100 µM og 40 µM; 20 mM fosfat buffer, pH 7,4),

sørget for oksidasjon av sterke antioksidanter (askorbinsyre) og middels sterke antioksidanter (quercetin) på 10 minutter. Denne målevarigheten er praktisk og sikrer den nødvendige målekvaliteten.

Analyse av kinetikken til kjemiluminescens viste at i de studerte objektene (avkok av rognefrukter, nyper, hagtorn og infusjon av bringebærfrukter) er de viktigste antioksidantene antioksidanter med middels styrke, inkludert flavonoider, og svak styrke (tokoferol, etc.). Basert på reduksjonen i summen av kjemiluminescenslys, ble den totale antioksidantkapasiteten for de studerte objektene beregnet. Sammenligning av de oppnådde TAU-verdiene med resultatene av kjemisk analyse viste at produkter som inneholder samme mengde antioksidanter med forskjellige forhold kan variere i deres evne til effektivt å beskytte kroppen mot de skadelige effektene av frie radikaler. Den beskrevne teknikken er lovende for å studere planteobjekter som inneholder en blanding av ulike antioksidanter. Samtidig er det preget av enkelhet og lave forskningskostnader. Kombinasjonen av måling av kjemiluminescenskinetikk med matematisk modellering av reaksjoner vil ikke bare automatisere prosessen med å bestemme TAU, men også bestemme bidraget fra individuelle grupper av antioksidanter til indikatoren.

Litteratur

1. Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. Frie radikaler som deltakere i regulatoriske og patologiske prosesser. I: Grigoriev A.I., Vladimirov Yu.A., redaktører. Grunnfag - medisin. Biofys. honning. technol. M.: MAX Trykk; 2015. bind 1. s. 38-71.

3. Khasanov V.V., Ryzhova G.L., Maltseva E.V. Metoder for å studere antioksidanter. Chem. raste. råvarer. 2004; (3): 63-75.

4. Vasiliev R. F., Kancheva V. D., Fedorova G. F., Butovska D. I., Trofimov A. V. Antioksidantaktivitet av chalcones. Kjemiluminescensbestemmelse av reaktivitet og kvantekjemisk beregning av energier og strukturer til reagenser og mellomprodukter. Kinetikk og katalyse. 2010; 51 (4): 533-41.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil"ev RF, Veprintsev TL. Peroxy-

radikalmediert kjemiluminescens: mekanistisk mangfold og grunnleggende for antioksidantanalyse. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Evaluering av antiradikal kapasitet ved H2O2-hemin-indusert luminol-kjemiluminescens. J Agric Food Chem. 3. desember 2003; 51 (25): 7481-8.

9. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V. Frie radikaler og cellulær kjemiluminescens. Uspekhi biol. chem. 2009; 49: 341-88.

10. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V., Izmailov D. Yu. Kinetisk kjemiluminescens som en metode for å studere reaksjonene til frie radikaler. Biofysikk. 2011; 56 (6): 1081-90.

11. Izmailov D. Yu., Demin E. M., Vladimirov Yu. A. Bestemmelse av antioksidantaktivitet ved å måle kjemiluminescenskinetikk. Fotobiologi og fotomedisin. 2011; 7 (2): 70-6.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminolluminescens indusert av 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termolyse. Gratis

Radic Res Commun. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Om bruken av quenching av luminolluminescens for å evaluere SOD-aktivitet. Free Radic Biol Med. juni 1994; 16 (6): 833-7.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Evaluering av totalt antioksidantpotensial (TRAP) og total antioksidantreaktivitet fra luminolforsterkede kjemiluminescensmålinger. Free Radic Biol Med. 1995 februar; 18 (2): 153-8.

17. Cormier MJ, Prichard PM. En undersøkelse av mekanismen for den luminescerende peroksidasjonen av luminol ved stoppet strømningsteknikker. J Biol Chem. 1968 25. september; 243 (18): 4706-14.

21. Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A. Bestemmelse av antioksidanter ved aktivert kjemiluminescens ved bruk av 2,2"-azo-bis(2-amidinopropan). Vestn. MGU. Ser. 2. Chem 2012;53(3): 187-93.

24. Helsedepartementet i USSR State Pharmacopoeia of the USSR XI ed. Vol. 2 "Generelle analysemetoder. Medisinplanteråvarer." M.: Medisin; 1987. s. 147-8.

25. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Kornyushina M. A. Studie av nypeekstraksjonspreparater. Apotek. 2012; (2): 14-6.

26. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Avrach A. S. Studie av hagtornfrukter ved bruk av ulike metoder for konservering og vandig ekstraksjon. Apotek. 2010; (5): 16-8.

27. Avrach A. S., Sergunova E. V., Kuksova Ya. V. Biologisk aktive stoffer av frukt og vandige ekstrakter av vanlige bringebær. Apotek. 2014; (1): 8-10.

28. Avrach A. S., Samylina I. A., Sergunova E. V. Studie av biologisk aktive stoffer av hagtornfrukter - råvarer for fremstilling av homeopatiske matrikstinkturer. På lør. vitenskapelig tr. basert på materialer fra XXIV Moskva. internasjonal homeopat. konf. "Utvikling av den homøopatiske metoden i moderne medisin"; 24.-25. januar 2014; Moskva. M.; 2014. s. 146-7.

29. Sergunova E. V., Sorokina A. A. Studie av sammensetningen av biologisk aktive stoffer i medisinske planteråvarer av ulike konserveringsmetoder. På lør. avhandlinger basert på materialer fra XX Ross. nasjonal kongr. "Mennesket og medisin"; 15-19 april 2013; Moskva. M.: EKOOnis; 2013. s. 184-90.

30. Aleksandrova E. Yu., Orlova M. A., Neiman P. L. Studie av peroksidaseaktivitet i ekstrakter fra rhizomer og røtter av pepperrot og dens stabilitet overfor ulike påvirkninger. Vestn. Moskva statsuniversitet. Ser. 2. Chem. 2006; 47 (5): 350-2.

1. Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Svobodnye radikaly kak uchastniki regulyatornykh i patologicheskikh protsessov. I: Grigor"ev AI, Vladimirov YuA, redaktører. Fundamental"nye nauki - medicitsine. Biofizicheskie meditsinskie tekhnologii. Moskva: MAKS Press; 2015. v. 1. s. 38-71. russisk.

2. Chanda S, Dave R. In vitro-modeller for evaluering av antioksidantaktivitet og noen medisinplanter som har antioksidantegenskaper: En oversikt. Afr J Microbiol Res. 2009 desember; 3 (13): 981-96.

3. Khasanov VV, Ryzhova GL, Mal"tseva EV. Metody issledovaniya antioksidantov. Khimija Rastitel"nogo Syr"ja. 2004; (3): 63-75. Russisk.

4. Vasil"ev RF, K""ncheva VD, Fedorova GF, B""tovska DI, Trofimov AV. Antioksidantnaya aktivnost" khalkonov. Khemilyuminestsentnoe opredelenie reaktsionnoi sposobnosti i kvantovo-khimicheskii raschet energii i stroeniya reagentov i intermediatov. Kinetikk og katalyse. 2010; 51 (4): 533-41. russisk.

5. Slavova-Kazakova AK, Angelova SE, Veprintsev TL, Denev P, Fabbri D, Dettori MA, et al. Antioksidantpotensialet til curcumin-relaterte forbindelser studert ved kjemiluminescenskinetikk, kjedebrytende effektivitet, renseaktivitet (ORAC) og DFT-beregninger. Beilstein J Org Chem. 11. august 2015; 11: 1398-411.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil"ev RF, Veprintsev TL. Peroksy-radikal-mediert kjemiluminescens: mekanistisk mangfold og grunnleggende for antioksidantanalyse. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

7. Fedorova GF, Menshov VA, Trofimov AV, Vasil"ev RF. Enkel kjemiluminescensanalyse for antioksidative egenskaper til vegetabilske lipider: grunnleggende og illustrerende eksempler. Analytiker. 2009 oktober; 134 (10): 2128-34.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Evaluering av antiradikal kapasitet ved H2O2-hemin-indusert luminol

9. Vladimirov YuA, Proskurnina EV. Svobodnye radikaly i kletochnaya khemilyuminestsentsiya. Usp Biol Khim. 2009; 49: 341-88. russisk.

10. Vladimirov YuA, Proskurnina EV, Izmailov DYu. Kineticheskaya khemilyuminestsentsiya kak metode izucheniya reaktsii svobodnykh radikalov. Biofysikk. 2011; 56 (6): 1081-90. russisk.

11. Izmailov DYu, Demin EM, Vladimirov YuA. Opredelenie aktivnosti antioksidantov metodom izmereniya kinetiki khemilyuminestsen-tsii. Fotobiologi og fotomedisin. 2011; 7 (2): 70-6. russisk.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminolluminescens indusert av 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropan) termolyse. Free Radic Res Commun. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Om bruken av quenching av luminolluminescens for å evaluere SOD-aktivitet. Free Radic Biol Med. juni 1994; 16 (6): 833-7.

14. Lissi EA, Escobar J, Pascual C, Del Castillo MD, Schmitt TH, Di Mascio P. Synlig kjemiluminescens assosiert med reaksjonen mellom methemoglobin eller oksyhemoglobin med hydrogenperoksid. Photochem Photobiol. 1994 november; 60 (5): 405-11.

16. Landi-Librandi AP, de Oliveira CA, Azzolini AE, Kabeya LM, Del Ciampo JO, Bentley MV, et al. In vitro-evaluering av antioksidantaktiviteten til liposomale flavonoler ved hjelp av HRP-H2O2-luminol-systemet. J Microencapsul. 2011; 28 (4): 258-67.

17. Cormier MJ, Prichard PM. En undersøkelse av mekanismen

av den luminescerende peroksidasjonen av luminol ved stoppet strømningsteknikker. J Biol Chem. 1968 25. september; 243 (18): 4706-14.

18. Chang CL, Lin CS, Lai GH. Fytokjemiske egenskaper, frie radikaler og nevrobeskyttelse av fem medisinske planteekstrakter. Evid-basert komplement Alternat Med. 2012; 2012: 984295. doi: 10.1155/2012/984295. Epub 2011 10. august.

19. Chang CL, Lin CS. Fytokjemisk sammensetning, antioksidantaktivitet og nevrobeskyttende effekt av Terminalia chebula Retzius-ekstrakter. Evid-basert komplement Alternat Med. 2012; 2012: 125247. doi: 10.1155/2012/125247. Epub 2011 5. juli.

20. Georgetti SR, Casagrande R, Di Mambro VM, Azzolini AE, Fonseca MJ. Evaluering av antioksidantaktiviteten til forskjellige flavonoider ved kjemiluminescensmetoden. AAPS PharmSci. 2003; 5 (2): 111-5.

21. Alekseev AV, Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Opredelenie antioksidantov metodom aktivirovannoi khemilyuminestsentsii s ispol"zovaniem 2,2"-azo-bis(2-amidinopropana). Moscow University Chemistry Bulletin. 2012; 53 (3): 187-93. russisk.

22. Pogacnik L, Ulrih NP. Anvendelse av optimalisert kjemiluminescensanalyse for å bestemme antioksidantkapasiteten til urteekstrakter. Luminescens. 2012 nov-des; 27 (6): 505-10.

23. Saleh L, Plieth C. Totale antioksidanter med lav molekylvekt som en oppsummeringsparameter, kvantifisert i biologiske prøver ved en kjemiluminescenshemmingsanalyse. Nat Protoc. 2010 sep; 5 (10): 1627-34.

24. Ministerstvo zdravookhraneniya SSSR. Gosudarsvennaya farmakopeya SSSR. 11. utg. Iss. 2. "Obshchie-metodianalyse."

Lekarstvennoe rastitel "noe syr"e". Moskva: Medltsina; 1987. s. 147-8. Russisk.

25. Sergunova EV, Sorokina AA, Kornyushina MA. Izuchenie ekstraktsionnykh preparatov shipovnika. Apotek. 2012; (2): 14-6. russisk.

26. Sergunova EV, Sorokina AA, Avrach AS. Izuchenie plodov boyaryshnika razlichnykh sposobov konservatsii i vodnykh izvlechenii. Farmatsiya. 2010; (5): 16-8. russisk.

27. Avrach AS, Sergunova EV, Kuksova YaV. Biologicheski aktivnye veshchestva plodov i vodnykh izvlechenii maliny obyknovennoi. Farmatsiya. 2014; (1): 8-10. russisk.

28. Avrach AS, Samylina IA, Sergunova EV. Izuchenie biologicheski aktivnykh veshchestv plodov boyaryshnika - syr"ya dlya prigotovleniya nastoek gomeopaticheskikh matrichnykh. Proceedings of the 14th Moscow International Homeopathic Conference "Razvitie gomeopaticheskogo methoda v sovremennoi 20145"; Moscow meditine 2025; jan. 14. s. 146- 7. Russisk.

29. Sergunova EV, Sorokina AA. Izuchenie sostava biologicalheski aktivnykh veshchestv v lekarstvennom rastitel "nom syr"e razlichnykh sposobov konservatsii. Proceedings fra den 20. russiske nasjonalkongressen "Chelovek i lekarstvo"; 2013 april 1519; Moskva. Moskva: EkOOnis; 2013. s. 184-90. russisk.

30. Aleksandrova EYu, Orlova MA, Neiman PL. Izuchenie peroksidaznoi aktivnosti v ekstraktakh iz kornevishcha i kornei khrena i ee stabil"nosti k razlichnym vozdeistviyam. Moscow University Chemistry Bulletin. 2006; 47 (5): 350-2. Russisk.