본 발명은 식품 산업에 관한 것이며 총 항산화 활성을 결정하는 데 사용될 수 있습니다. 방법은 다음과 같이 수행됩니다: 분석물은 시약 0.006 M Fe(III) - 0.01 M o-페난트롤린과 상호작용합니다. 아스코르빈산(AA)은 1:100의 비율로 첨가된 동일한 시약과 반응합니다. 다음으로, 최소 90분 동안 배양하고 광도계를 510 ± 20 nm에서 측정합니다. 그 후, 물질 양에 대한 분석 신호 크기의 의존성이 확립되고 총 AOA 값이 계산됩니다. 제시된 방법을 사용하면 노동 집약적이지 않고 식물 재료와 이를 기반으로 한 식품의 총 항산화 활성을 보다 안정적으로 결정할 수 있습니다. 2 급여 f-ly, 병 1개, 테이블 5개.

본 발명은 분석 화학에 관한 것이며 식물 재료 및 이에 기초한 식품의 총 항산화 활성(AOA)을 결정하는 데 사용될 수 있습니다.

제품의 수성 추출물과 전기적으로 생성된 브롬 화합물의 상호 작용을 기반으로 차의 총 AOA를 결정하는 전기량 측정 방법이 알려져 있습니다(I.F.Abdulin, E.N. Turova, G.K. Budnikov. 전기적으로 차 추출물의 항산화 능력에 대한 전기량 측정 평가) 브롬 생성 // Journal of Analyst 2001. T.56 No. 6. P.627-629). 적정제로 전기 생성된 브롬 화합물을 선택하는 것은 라디칼, 산화환원, 친전자성 치환 및 다중 결합에서의 첨가와 같은 다양한 반응을 시작할 수 있는 능력 때문입니다. 이를 통해 우리는 항산화 특성을 지닌 다양한 생물학적 활성 차 화합물을 다룰 수 있습니다. 이 방법의 단점은 항산화제가 아닌 물질과 브롬화 반응이 일어날 가능성이 있고, 총 AOA의 결과 값을 전기 단위(kC/100g)로 표현하므로 얻은 결과를 평가하기 어렵다는 점입니다.

수은 필름 전극의 0.0 ~ -0.6 V(rel. sat. h.s.e.) 전위 범위에서 산소 전기환원 전류의 상대적 변화를 통해 총 항산화 활성을 결정하는 전압전류법이 알려져 있습니다(특허 2224997, 러시아, IPC 7 G 01 N 33/01. 항산화제의 총 활성 측정을 위한 전압전류법 / Korotkova E.I., Karbainov Yu.A. - 2004년 6월 6일; 이 방법의 단점은 부전기화학적 반응이 발생하여 그 결과 항산화제 측정 효율이 감소하여 결과의 신뢰성이 감소한다는 점입니다.

분광광도법 또는 화학발광 검출을 사용하여 말론알데히드로의 지질 과산화에 의해 예방 및 치료 항산화제의 총 AOA를 모니터링하는 방법이 알려져 있습니다(특허 2182706, 러시아, IPC 7 G 01 N 33/15, 33/52). 예방 및 치료용 항산화제의 항산화 활성 / Pavlyuchenko I.A., Fedosov S.R. - no. 이 경우 항산화 활성은 지질 과산화 생성물의 수준에 반비례합니다. 이 방법의 단점은 제한된 범위의 분석 대상으로 간주될 수 있습니다. 왜냐하면 이러한 조건에서는 지질이라는 한 가지 항산화제 그룹만 결정되기 때문입니다.

식물 추출물의 총 AOA를 결정하는 방법은 알려져 있으며, 이는 추출물을 리네톨 및 황산철(II)과 함께 배양하고, UV 조사를 통해 산화 반응을 시작한 다음, Triton X-A가 있는 상태에서 티오바르비투르산과 상호작용하는 것으로 구성됩니다. 100 (출원 97111917/13, 러시아, IPC 6 G 01 N 33/00. 일반적인 항산화 활성 측정 방법 / Rogozhin V.V. - Appl. 07/08/1997; 분광광도법을 수행할 때는 에탄올과 클로로포름을 7:3 비율로 혼합한 혼합물을 사용합니다. 생물학적 물질의 AOA 값은 추출물을 함유한 시료 내 반응 생성물인 말론디알데히드와 산화 촉진제를 함유한 시료의 축적 비율에 의해 결정됩니다. 이 방법의 단점은 UV 조사 중에 부반응이 발생할 가능성이 있어 얻은 분석 결과의 신뢰성이 떨어진다는 점입니다.

총 AOA를 결정하기 위해 나열된 방법에는 높은 노동 강도, 낮은 신뢰성, 총 AOA의 측정 값은 일반적으로 허용되는 물질과 관련이 없으며 비교할 수 없다는 등 여러 가지 단점이 있습니다.

청구된 발명과 가장 가까운 유사점은 산화제인 과산화수소의 존재 하에서 루미놀과 반응하는 동안 발생하는 화학발광을 측정하여 약용 식물의 전체 AOA를 결정하는 방법입니다(M.Kh.Navas, A.M.Khiminets, A.G.Azuero) 화학 발광에 의한 카나리아 종자 팅크 카나리아의 환원 능력 결정 // 분석 화학 저널 2004. T.59). 총 AOA를 정량화하기 위해 약용 원료 추출물의 환원력과 강력한 항산화제인 아스코르빈산 25~110μg의 활성을 비교하였습니다. 나열된 방법과 비교하여 프로토타입은 과산화수소를 산화제로 사용하여 광범위한 항산화제와 상호작용하며 물체의 총 AOA 측정값을 결정하고 일반적으로 아스코르빈산을 기준으로 표현합니다. 다른 단점을 유지하면서 신뢰할 수 있는 결과를 얻을 수 있는 항산화제를 허용했습니다. 단점은 또한 이 방법에 사용되는 장비의 복잡성을 포함합니다.

청구된 발명의 기술적 목적은 식물 재료 및 이를 기반으로 한 식품의 총 항산화 활성을 측정하기 위한 덜 노동 집약적이고 신뢰할 수 있는 방법을 개발하는 것입니다.

기술적 문제를 해결하기 위해 분석물을 0.006 M Fe(III) - 0.01 M o-페난트롤린 시약 및 아스코르브산(AA)과 1:100의 비율로 첨가된 동일한 시약과 상호 작용하는 것이 제안되었습니다. , 최소 90분 동안 배양하고 510±20 nm에서 광도계를 측정한 후 물질 양에 대한 분석 신호 값의 의존성을 확립하고 총 AOA 값을 계산합니다. 특히, 계산은 연구 중인 대상과 아스코르브산 사이의 정량적 대응 방정식에서 도출된 식(I)을 사용하여 수행할 수 있습니다.

여기서 a, b는 AC 양에 대한 분석 신호의 의존성에 대한 회귀 방정식의 계수입니다.

a", b" - 연구 대상 물체의 양에 대한 분석 신호의 의존성에 대한 회귀 방정식의 계수.

x 태양 - 연구 중인 환원제(샘플)의 질량, mg.

특정 조건에서 제안된 시약을 사용하면 선형 범위를 확장하고 결정된 아스코르브산 양의 하한을 줄일 수 있었습니다. 제안된 필수 특성 세트를 사용하면 이를 기반으로 광범위한 식물 재료 및 식품의 총 AOA를 결정할 수 있습니다.

정량적 대응 방정식은 동일한 항산화 활성 조건 하에서 아스코르브산 양에 대한 분석 신호의 의존성과 시험 대상의 양에 대한 분석 신호의 의존성을 연결합니다.

최소 제곱법을 사용하여 분석 신호의 크기에 대한 광도 측정 결과를 처리한 후(분석 화학의 K. Deffel Statistics. - M.: "Mir", 1994. P.164-169; A.K. Charykov 수학적 처리) 화학 분석 결과 - L.: Chemistry, 1984. pp. 137-144) 이러한 종속성은 선형 회귀 함수로 설명되었습니다. y=ax+b, 여기서 a는 회귀 계수, b는 자유 항입니다. 회귀 방정식의 계수 a는 x축에 대한 직선의 경사각의 탄젠트와 같습니다. 계수 b - 원점(0,0)에서 첫 번째 점(x 1, y 1)까지 y축을 따른 거리입니다.

계수 a와 b는 다음 공식을 사용하여 계산됩니다.

주어진 시간에 아스코르브산 양에 대한 AC 의존성에 대한 회귀 방정식의 형식은 다음과 같습니다.

y AK = a x AK(mg) + b,

연구 대상(환원제)의 양에 대한 AC 의존성에 대한 회귀 방정식:

y VOST =a" x VOST(mg)+b",

AK에서 VOST는 광도계 용액의 광학 밀도입니다.

x AA(mg), x VOST(mg) - 용액 내 아스코르브산(환원제) 농도;

그런 다음 함수 값을 동일시하여 연구 대상의 항산화 활성을 아스코르브산 양(mg) 단위로 계산하기 위한 공식(I)을 얻습니다.

그림은 환원제의 양에 대한 분석 신호의 의존성을 보여줍니다.

분석된 용액의 광학 밀도는 KFK-2MP 광전색도계를 사용하여 측정되었습니다.

o-페난트롤린이 철과 수용성 킬레이트를 형성하는 것으로 알려져 있습니다(F. Umland, A. Yasin, D. Tirik, G. Wünsch 분석 화학의 복합 화합물 - M.: Mir, 1975. - 531 p.). II) 적색-주황색, 이는 λ=512 nm에서 최대 흡수를 특징으로 합니다. 따라서 제안하는 방법에서는 λ=510±20 nm에서 측광을 수행한다.

반응에 투입되는 시약의 조성과 투입량의 최적화는 각 실험에서 연구된 모든 인자를 각 수준별로 변화시키는 “라틴방형”법을 이용한 다인자적 실험설계 결과를 바탕으로 진행되었다. 각 요인은 다른 수준의 다른 요인과 단 한 번만 만납니다. 이를 통해 연구 중인 각 요인으로 인한 효과를 별도로 분리하고 평가할 수 있습니다.

요인은 Fe(III), o-페난트롤린의 양 및 반응에 도입된 시약의 부피였습니다. 요인들의 조합은 한편으로는 충분한 감도와 다른 한편으로는 시간 경과에 따른 시약의 안정성을 갖춘 분석 신호(AS)의 광범위한 선형성을 제공해야 합니다. 이를 통해 각 요인에 대해 다음 수준을 식별할 수 있었습니다.

Fe(III)의 양: 0.003M(A1); 0.006M(A2); 0.009M(A3);

o-페난트롤린의 양: 0.01M(B1); 0.02M(B2); 0.03M(B3);

시약 용량: 0.5 ml(C 1); 1.0ml(C2); 2.0ml(C3)(표 1).

요인 수준의 최적 조합을 선택하기 위해 10 ~ 150μg 범위의 아스코르브산 양에 대한 AC의 보정 의존성을 얻었으며(함수의 선형성을 확인하는 데 필요함) 획득된 의존성의 회귀 방정식을 계산했습니다. , 그런 다음 주어진 양(120μg)의 아스코르브산에서 AC 값을 계산했습니다. 따라서 각 시약 조성(인자 A, B)에 대해 AC 값이 최대가 되는 부피(인자 C)를 선택하였다. 이를 통해 고려되는 조합 수를 9개로 줄일 수 있었습니다(표 2).

각 레벨의 총 AC를 비교하여 최대값을 갖는 양이 식별되었습니다: ΣA 2 (0.991); ΣB1(1.066); ΣC 2 (1.361). 이를 통해 최적의 시약 구성은 용액 100ml당 1.0ml의 반응에 도입되는 부피를 갖는 0.006M Fe(III) - 0.01M o-페난트롤린이라는 결론을 내릴 수 있었습니다.

시약의 최적 농도에서 우리는 반응 혼합물의 서로 다른 배양 시간에 아스코르브산 농도와 자연물에서 흔히 볼 수 있는 일부 환원제(탄닌, 루틴, 케르세틴)에 대한 AS 의존성의 변화를 연구했습니다(30, 60 , 90, 120분). 연구된 모든 환원제에 대해 그 함량에 대한 AC의 의존성은 10-150μg 범위에서 선형이고(그림 참조) AC 값은 배양 시간에 따라 달라지는 것으로 나타났습니다(표 3).

도면에서 루틴의 영향으로 AC의 변화가 미미하고 탄닌이 접근하며 케르세틴이 아스코르브산에 대한 유사한 의존성을 초과한다는 것을 알 수 있습니다. 연구된 모든 환원제에 대한 인큐베이션 시간에 따른 AS의 변화를 고려하면(표 3), 시간 경과에 따른 분석 신호의 안정화가 90분부터 관찰되는 것으로 나타났습니다.

표 3 시간에 따른 환원제 AC의 변화
시험물질	m 물질, mg/cm 3	분석 신호
시험물질	m 물질, mg/cm 3	반응 혼합물의 배양 시간, 분
30	60	90	120
아스코르빈산	10	0,038	0,042	0,044	0,044
100	0,340	0,352	0,360	0,363
타닌산	10	0,029	0,037	0,042	0,043
100	0,280	0,295	0,303	0,308
루틴	10	0,013	0,016	0,019	0,019
100	0,150	0,166	0,172	0,175
케르세틴	10	0,031	0,044	0,051	0,053
100	0,420	0,431	0,438	0,442

결정된 AOA 값의 종합적 특성을 입증하기 위해 다양한 비율의 탄닌, 루틴, 케르세틴 및 아스코르브산과 같은 환원제를 포함하는 모델 용액에 대한 Fe(III) 시약 - o-페난트롤린의 효과를 연구했습니다. 표 4는 모델 혼합물의 분석 결과를 나타냅니다.

표 4 모델 혼합물 분석 결과(P=0.95; n=3)
혼합물의 성분 수	총 AOA, 계산, µgAC	총 AOA, 실측치, µgAC
소개	총 AOA, 계산, µgAC	총 AOA, 실측치, µgAC	AK의 관점에서
AK	타닌산	루틴	케르세틴	AK	타닌산	루틴	케르세틴
-	20	20	20	-	16,77	9,56	32,73	59,06	57,08
-	10	10	10	-	8,35	4,77	16,41	29,53	26,95
-	50	10	10	-	42,02	4,77	16,41	63,20	55,04
-	10	50	10	-	8,35	23,93	16,41	48,69	50,06
-	10	10	50	-	8,35	4,77	81,70	94,82	91,61
-	30	10	10	-	25,19	4,77	16,41	46,37	39,24
-	10	30	30	-	8,35	14,35	49,06	71,76	73,47
20	20	20	20	20	16,77	9,56	32,73	79,06	96,29
50	10	10	10	50	8,35	4,77	16,41	87,95	93,07
10	50	10	10	10	42,02	4,77	16,41	73,20	78,15
10	10	50	10	10	8,35	23,93	16,41	58,69	78,74
10	10	10	50	10	8,35	4,77	81,70	104,82	121,45
30	30	10	10	30	25,19	4,77	16,41	76,37	84,59
10	10	30	30	10	8,35	14,35	49,06	81,76	103,31

총 AOA의 이론값 계산은 동일한 항산화 활성 조건 하에서 아스코르브산과 관련하여 연구된 환원제의 항산화 능력을 특성화하는 정량적 대응 방정식을 사용하여 수행되었습니다.

실험적(발견된) AOA의 값은 아스코르브산 양에 대한 AC 의존성에 대한 평균 회귀 방정식을 사용하여 계산되었습니다. 표 4에 제시된 결과로부터 실험적으로 얻은 AOA 값이 이론적으로 계산된 AOA 값과 만족스럽게 일치하는 것이 분명합니다.

따라서 결정된 AOA 값은 요약 지표이며 정량적 대응 방정식을 사용하여 그 값을 결정하는 것이 정확합니다.

제안된 방법을 실제 샘플을 대상으로 테스트하였다. 실제 시료 또는 그 추출물의 총 AOA를 결정하기 위해, 최소 90분의 반응 혼합물의 인큐베이션 시간을 사용하여 분석물 및 아스코르브산의 양에 대한 AC의 보정 의존성을 얻었습니다. 총 AOA의 계산은 식(I)에 따라 수행되었으며 테스트 개체의 그램당 아스코르브산 mg(mgAA/g)으로 표시되었습니다.

제안된 방법의 정확성을 확인하기 위해 이 샘플을 알려진 방법을 사용하여 테스트하여 아스코르브산(GOST 24556-89 과일 및 채소 가공 제품, 비타민 C 측정 방법) 및 주요 환원제: 차의 탄닌 함량을 평가했습니다. (GOST 19885-74 차. 탄닌 및 카페인 함량을 결정하는 방법), 로즈힙의 유기산 양 (GOST 1994-93 로즈힙. 기술 조건) (표 5).

항산화제(AO)- 산화를 방지하는 물질.

현재 항산화제를 측정하는 방법에는 광도 측정, 화학, 전기화학 등 다양한 방법이 있습니다. 그러나 그 중 다수는 이러한 방법으로 얻은 결과를 이해하고 추가로 사용하기 어렵게 만드는 심각한 단점을 가지고 있습니다.

가장 일반적인 단점은 다음과 같습니다.
항산화 효과를 측정하기 위해 생물학적 시스템에 대한 인공적이거나 특징적이지 않은 조건이 사용됩니다.

예를 들어 생물학적 활성산소 반응 대신 순수 화학적 산화환원 반응을 사용하거나 전류에 노출되었을 때 물질이 전자를 주고 받는 능력을 측정합니다.

이러한 조건에서 얻은 측정 결과로는 연구 중인 물질이 신체에서 동일한 "항산화" 효과를 나타내는지 여부를 말할 수 없습니다. 항산화 효과의 측정은 축적된 산화 생성물(산화 마커)의 양을 측정하여 수행됩니다.

이러한 방식으로 테스트 샘플에서 항산화제의 양을 측정하는 것이 실제로 가능하지만 항산화제의 활성에 대한 매우 중요한 정보가 누락됩니다.항산화제의 활성을 무시하면 그 양을 결정하는 데 심각한 오류가 발생할 수 있습니다. 예를 들어, 천천히 그러나 장기간에 걸쳐 작용하는 "약한" 항산화제의 경우입니다.
일반적으로 항산화 측정 분야에는 다양한 방법으로 얻은 결과를 비교할 수 있는 표준화된 방법이 없습니다.
화학발광 방식- 화학발광 방법을 사용하면 두 가지 독립적인 지표를 통해 항산화 효과가 있는 모든 화합물을 특성화할 수 있습니다.
- 항산화 능력(AOE)- 특정 부피의 샘플에 포함된 화합물을 중화할 수 있는 자유 라디칼의 총량입니다.
- 항산화 활성(AOA)- 자유 라디칼의 중화 속도, 즉 단위 시간당 중화되는 라디칼의 수.

이러한 조건에서 얻은 측정 결과로는 연구 중인 물질이 신체에서 동일한 "항산화" 효과를 나타내는지 여부를 말할 수 없습니다. 항산화제의 효과는 정량적(AOE)과 정성적(AOA)이라는 두 가지 지표로 평가되어야 한다는 중요한 이해를 제공합니다.
다음 그림은 이러한 상황을 보여줍니다.

화학발광에 대한 다양한 항산화제의 효과
(그래프 옆의 숫자는 항산화제 농도를 나타냅니다):
왼쪽은 "강한" 항산화제이고, 오른쪽은 "약한" 항산화제입니다.

항산화제는 활성이 크게 다릅니다. "강력한" 항산화제가 있습니다. 자유라디칼을 빠른 속도로 억제하고 화학발광을 완전히 억제하는 활성이 높은 항산화제입니다. 이러한 항산화제는 낮은 농도에서도 최대의 효과를 가지며 빠르게 소모됩니다.

반면에 "약한" 항산화제가 있습니다. 활성산소를 낮은 비율로 억제하고 화학발광을 부분적으로만 억제하는 저효능 항산화제입니다.

이러한 항산화제는 고농도에서만 유의미한 효과를 나타내지만, 동시에 천천히 소모되어 오랫동안 작용합니다.
화학발광법은 항산화 지표를 결정하는 데 사용될 수 있습니다.
생물학적 체액(혈장, 타액, 소변);
약리학적 약물 및 식이보충제;
음료 및 식품 첨가물;

화장품 및 케어 제품;

등.
항산화제 측정을 위한 화학발광 방법을 구현하려면 다음 장비를 사용하는 것이 좋습니다.

1 화학발광계 Lum-100 - 온도 조절 기능과 시료 1개의 화학발광 등록 기능을 제공합니다.화학발광측정기 Lum-1200 - 최대 12개 샘플에 대해 온도 제어 및 화학발광 동시 등록 기능을 제공합니다.볼샤코바 L.S. 1밀렌티예프 V.N. 2

산니코프 D.P. 3

카즈민 V.M. 2

1 고등 전문 교육을 위한 연방 정부 예산 교육 기관 "오룔 주립 경제 무역 연구소"

영양소의 항산화 활성을 평가하기 위해 화학발광을 사용할 가능성이 조사되었습니다. 제안된 방법은 알칼리성 매질에서 루미놀의 화학발광을 기반으로 하며, 그 강도는 화학발광 샘플의 과산화물 양에 따라 달라집니다. 화학발광은 투여 펌프, 차광 챔버, 유리 진공 광전자 증배관 및 컴퓨터 시스템을 포함하는 개발된 설비를 사용하여 기록되었습니다. 화학발광을 강화하기 위해 황화철칼륨 용액을 루미놀에 첨가했습니다. 분석된 시료를 루미놀 용액에 투입하는 순간의 화학발광 강도 변화를 기록하였다. 분석시료로는 건식저온증류를 통해 얻은 민들레 추출물을 사용하였다. 이는 높은 항산화 활성으로 알려진 페놀성 화합물을 함유하고 있습니다. 화학발광 방법을 사용하여 다양한 식품 화합물의 항산화 특성을 결정할 수 있다는 것이 확립되었습니다.

참고문헌 링크

Panichkin A.V., Bolshakova L.S., Milentyev V.N., Sannikov D.P., Kazmin V.M. 식품 물질의 항산화 특성을 평가하기 위한 화학 발광의 사용 // 합리적인 영양, 식품 첨가물 및 생물 자극제. – 2014. – 6호. – P. 36-37;
URL: http://journal-nutrition.ru/ru/article/view?id=283 (접속 날짜: 2019년 12월 17일). 출판사 "자연 과학 아카데미"에서 발행하는 잡지에 주목합니다.

명제

1.4 항산화 연구 방법

항산화 활성은 다음과 같이 분류됩니다: 발현된 AOA를 기록하는 방법(부피 측정, 광도 측정, 화학 발광, 형광, 전기 화학)에 따라; 산화원 유형별; 산화되는 화합물의 유형별; 산화된 화합물을 측정하는 방법으로.

그러나 항산화 활성을 측정하는 가장 잘 알려진 방법은 다음과 같습니다.

1 TEAC(trolox 등가 항산화 능력): 이 방법은 다음 반응을 기반으로 합니다.

메트미오글로빈 + H 2 O 2 > 페릴글로빈 + ABTS > ABTS * + AO.

Trolox 등가법(TEAC)은 2,2-아지노비스 라디칼 양이온(ABTS)을 감소시켜 스펙트럼의 장파장 영역(600nm)에서 흡수를 억제하는 항산화제의 능력을 기반으로 합니다. 이 방법의 중요한 단점은 라디칼을 생성하는 2단계 반응입니다. 이는 표준화된 시약 세트가 분석에 사용된다는 사실에도 불구하고 분석 시간을 늘리고 결과의 분산을 증가시킬 수 있습니다.

2 FRAP(철 환원 항산화력): 이 방법은 다음 반응을 기반으로 합니다.

Fe(III)-트리피리딜트리아진 + AO>Fe(II)-트리피리딜트리아진.

철분 감소/산화 방지 능력(FRAP). 여기에 사용된 반응은 Fe(III)-트리피리딜트리아진을 Fe(II)-트리피리딜트리아진으로 환원시키는 것입니다. 그러나 이 방법은 글루타티온과 같은 일부 항산화제를 검출할 수 없습니다. 이 방법을 사용하면 저분자량 항산화제를 직접 측정할 수 있습니다. 낮은 pH에서 Fe(III)-트리피리딜트리아진 복합체가 Fe(II) 복합체로 환원되면 강렬한 파란색이 나타납니다. 측정은 반응 혼합물에서 생성된 반응종의 산화 효과를 억제하는 항산화제의 능력을 기반으로 합니다. 이 방법은 간단하고 빠르며 구현 비용이 저렴합니다.

3 ORAC(산소 라디칼 흡광도): 이 방법은 다음 반응을 기반으로 합니다.

Fe(II)+H 2 O 2 >Fe(III) + OH*+AO>OH* + 루미놀.

산소 라디칼 흡광도(ORAC) 측정. 이 방법에서는 ROS와의 상호작용으로 인해 발생하는 기질(피코에리트린 또는 플루오레세인)의 형광이 기록됩니다. 테스트 샘플에 항산화제가 포함되어 있으면 대조 샘플에 비해 형광 감소가 관찰됩니다. 이 방법은 원래 1992년 국립 노화 연구소의 Guohua Kao 박사에 의해 개발되었습니다. 1996년 Kao 박사는 USDA 노화 연구 센터의 공동 그룹에서 Ronald Pryer 박사와 팀을 이루어 반자동 방법을 개발했습니다. 생성되었습니다.

4 TRAP(총 라디칼 포획 항산화 매개변수): 이 방법은 다음 반응을 기반으로 합니다.

AAPH+AO>AAPH* + PL(FE).

이 방법은 퍼옥실 라디칼 2,2-아조비스(2-아미디노프로판) 디히드로클로라이드(AAPH)와 상호작용하는 항산화제의 능력을 활용합니다. TRAP 수정은 분석 신호를 기록하는 방법으로 구성됩니다. 대부분 분석의 마지막 단계에서 퍼옥시 라디칼 AAPH는 발광(루미놀), 형광(디클로로플루오레세인 디아세테이트, DCFH-DA) 또는 기타 광학 활성 기질과 상호작용합니다.

수용성 비타민 E 유도체 Trolox(6-하이드록시-2,5,7,8-테트라메틸크로만-2-카르복시산)는 TEAC, ORAC 및 TRAP 방법의 표준으로 사용됩니다.

최근 항산화 활성을 평가하기 위해 전기화학적 방법을 활용하는 것에 대한 관심이 높아지고 있다. 이러한 방법은 감도가 높고 분석 속도가 빠릅니다.

일부 식품의 항산화 활성 평가는 에놀(-OH) 및 설프히드릴(-SH) 그룹으로 인한 산화환원 반응에 참여하는 항산화 물질의 특성을 사용하여 전위차법으로 수행됩니다.

용액의 항산화 특성 결정은 항산화제와 매개체 시스템의 화학적 상호작용을 기반으로 하며, 이로 인해 산화환원 전위가 변화됩니다. 전기화학전지는 산화환원 전위를 측정하기 전 K-Na-인산염 완충액, Fe(III)/Fe(II) 매개체 시스템 및 복합 전극을 포함하는 용기입니다. 항산화 활성은 g-eq/l로 평가됩니다.

항산화 활성을 측정하기 위한 전류측정법은 특정 전위 하에서 작동 전극 표면에서 시험 물질이 산화되는 동안 발생하는 전류를 측정하는 것을 기반으로 합니다. 전류측정 방법의 감도는 작동 전극의 특성과 이에 적용되는 전위에 따라 결정됩니다. 폴리페놀과 플라보노이드의 전류 측정 검출기의 검출 한계는 나노 피코그램 수준입니다. 이러한 낮은 농도에서는 서로 다른 항산화제가 함께 존재할 때 상호 영향을 미칠 가능성이 낮으며, 특히 시너지 현상이 나타납니다. . 이 방법의 단점은 특이성입니다. 이러한 조건에서는 산소 전기환원 전위 영역에서 자체적으로 산화되거나 환원되는 항산화제를 분석할 수 없습니다. 이 방법의 장점은 속도, 전립선 및 민감도입니다.

전기적으로 생성된 산화제를 이용한 정전류 전기량법(Galvanostatic coulometry) 방법 - 이 방법은 지용성 항산화제 분석에 적용 가능합니다.

아스코르브산 측정을 위해 다양한 방법이 개발되었습니다.

용액에 간단히 담가서 니켈(II) 헥사시아노철산염 필름으로 개질된 알루미늄 전극을 사용하는 전류측정법;

Wawele 시약과 구리(II)로 변성된 규산 크세로겔을 지시약 분말로 사용하여 아스코르브산의 고상 분광 광도 및 육안 시험 측정 방법;

아스코르브산의 화학발광 측정은 황산 매질에서 로다민 B와 세륨(IV)의 화학발광 반응을 사용하는 유동 주입 방법으로 수행할 수 있습니다.

수성 및 수성 유기 매질에서 양극 전압전류법을 사용하여 10 -8 -10 -3 g/cm 3 범위의 아스코르브산 측정.

가장 일반적인 방법은 FRAP 방법으로, 빠르고 민감합니다. 지난 수십 년 동안 FRAP 방법을 사용하여 항산화 활성을 측정하는 다양한 방법이 개발되었습니다(표 1).

표 1 다양한 물체의 항산화 활성을 측정하기 위한 FRAP 방법 개발 및 적용

	분석대상	메모
	혈장	t=4분 반응 화학양론과 첨가성을 연구했습니다.
	차, 와인	폴리페놀로 인한 AOA 측정
		다양한 차 품종의 AOA 값을 비교했습니다.
풀리도, 브라보, 사우라-칼릭스토	모델 솔루션	t=30분. 비수용매의 영향이 밝혀졌다
	식물
	혈액, 조직	PIA 방법. 이물질의 영향이 테스트되었습니다.
피루지, 라칸나, 페트루치 e.a.	모델 솔루션	다양한 AO 결정의 민감도는 구조와 산화환원 전위의 함수로 연구되었습니다.
카탈린치, 밀로스,	다양한 와인
Temerdashev, Tsyupko 및 기타.	모델 혼합물
로지노바, 코노발로바	약 약	시험방법
Temerdashev, Tsyupko 및 기타.	드라이 레드 와인	AOA와 와인 품질의 다른 지표와의 상관관계
표 1의 계속
	모델 혼합물	다양한 AO를 결정하는 민감도를 연구했습니다.
Vershinin, Vlasova, Tsyupko	모델 혼합물	산화제가 부족할 때 신호가 무첨가인 것으로 밝혀졌습니다.
Anisimovich, Deineka 등.	모델 솔루션	AOA를 평가하기 위한 운동학적 매개변수가 제안되었습니다.

참고: 일반적으로 지정됨: FIA-플로우 주입 분석, TPTZ-트리피리딜트리아진, DIP-2,2,-디피리딜, PHEN-o-페난트롤린, DPA-피리딘 디카르복실산, FZ-페로진, AA-아스코르브산, CT-카테콜, t -노출 시간, 분.

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키워드

자유 라디칼/산화방지제/ 항산화 활성 / 총 항산화 능력 / 화학발광/ 루미놀 / 활성산소 / 항산화 / 항산화활성 / 총항산화능력 / 화학발광 / 루미놀

주석 화학 과학에 관한 과학 기사, 과학 연구의 저자 - Georgy Konstantinovich Vladimirov, E. V. Sergunova, D. Yu.

약용 식물 재료는 인체의 항산화제 공급원 중 하나입니다. 식물체의 항산화제 함량을 측정하는 방법 중 화학발광 분석법이 널리 보급되어 있습니다. 이 작업에서는 추정에 사용되었습니다. 총 항산화 능력(OAE) 마가목 열매, 장미 엉덩이, 산사나무속 달임 및 라즈베리 열매 주입. 실험에서 동역학이 기록되었습니다. 화학발광양 고추 냉이 과산화 효소, 과산화수소 및 루미놀로 구성된 시스템. 시료 내 시스템 성분의 농도와 부피는 측정 시간(10분) 동안 강한 항산화물질(아스코르브산)과 중간 항산화물질(퀘르세틴)이 완전히 산화되도록 선택되었습니다. 광량 변화를 기반으로 OAE를 계산하는 방법이 제안되고 타당성이 입증되었습니다. 화학발광식물 샘플이 있는 경우. 동역학 분석 화학발광는 연구 대상이 플라보노이드를 포함한 중간 강도의 항산화제와 약한 항산화제(토코페롤 등)에 의해 지배된다는 것을 보여주었습니다. 연구 대상에 대해 계산된 OAE 값과 화학적 분석 데이터를 비교한 결과, 유형별로 비율이 다른 동일한 양의 항산화제를 함유한 제품이 자유 라디칼의 유해한 영향으로부터 신체를 보호하는 능력이 다를 수 있음이 나타났습니다. . 설명된 기술은 다양한 유형의 항산화제 혼합물을 포함하는 식물 개체를 연구하는 데 유망합니다.

약용 식물 재료의 총 항산화 능력에 대한 화학발광 측정

약용 식물 재료는 인체의 항산화제 공급원 중 하나입니다. 화학발광 분석은 식물 재료의 항산화제 함량을 결정하는 일반적인 방법 중 하나입니다. 우리 연구에서는 화학발광 분석을 사용하여 산재, 장미, 산사나무의 과일 달임과 라즈베리 과일 주입의 총 항산화 능력(TAC)을 결정했습니다. 실험을 통해 고추냉이 과산화효소, 과산화수소 및 루미놀로 구성된 시스템의 화학발광 동역학이 확립되었습니다. 측정(10분) 동안 강한 항산화제(아스코르브산)와 평균 힘의 항산화제(케르세틴)가 완전히 산화되도록 시스템 구성 요소의 농도와 부피를 선택했습니다. 식물 시료 존재 시 화학발광 광량의 변화를 기반으로 한 TAC 계산 방법이 제안되고 입증되었습니다. 화학발광 동역학 분석에 따르면 플라보노이드 및 약한 항산화제(토코페롤 및 기타)를 포함하여 연구 대상에서 평균 힘의 항산화제가 지배적인 것으로 나타났습니다. 연구 대상 물체에 대해 계산된 TAC 값과 화학적 분석 데이터를 비교한 결과, 유형별로 항산화제 비율이 다른 동일한 양의 항산화제를 함유한 제품이 활성산소의 유해한 영향으로부터 신체를 보호하는 능력이 다를 수 있음이 나타났습니다. . 설명된 기술은 다양한 유형의 항산화제가 혼합된 식물 개체를 연구하는 데 유망한 기술입니다.

과학 연구의 텍스트 "약용 식물 재료의 총 항산화 능력을 측정하기 위한 화학발광 방법"이라는 주제로

약용식물재료의 총 항산화능을 측정하는 화학발광법

G. K. Vladimirov1^, E. V. Sergunova2, D. Izmailov1, A. Vladimirov1.

1모스크바 로모노소프 모스크바 주립대학교 기초의학부 의료생물물리학과

2 약학부 약리학과,

I.M. Sechenov의 이름을 딴 최초의 모스크바 주립 의과 대학, 모스크바

약용 식물 재료는 인체의 항산화제 공급원 중 하나입니다. 식물체의 항산화제 함량을 측정하는 방법 중 화학발광 분석법이 널리 퍼져 있다. 이 연구에서는 마가목, 로즈힙, 산사나무 열매 달임과 라즈베리 열매 주입의 총 항산화 능력(TAC)을 평가하는 데 사용되었습니다. 실험에서 화학발광의 동역학은 고추냉이 과산화효소, 과산화수소 및 루미놀로 구성된 시스템에서 기록되었습니다. 시료 내 시스템 성분의 농도와 부피는 측정 시간(10분) 동안 강한 항산화물질(아스코르브산)과 중간 항산화물질(퀘르세틴)이 완전히 산화되도록 선택되었습니다. 식물 샘플이 있을 때 화학발광 광합의 변화를 기반으로 OAE를 계산하는 방법이 제안되고 정당화되었습니다. 화학발광 동역학 분석에 따르면 플라보노이드를 포함한 중간 강도의 항산화제와 약한 항산화제(토코페롤 등)가 연구 대상에서 우세한 것으로 나타났습니다. 연구 대상에 대해 계산된 OAE 값과 화학적 분석 데이터를 비교한 결과, 유형별로 비율이 다른 동일한 양의 항산화제를 함유한 제품이 자유 라디칼의 유해한 영향으로부터 신체를 보호하는 능력이 다를 수 있음이 나타났습니다. . 설명된 기술은 다양한 유형의 항산화제 혼합물을 포함하는 식물 개체를 연구하는 데 유망합니다.

핵심어 : 활성산소, 항산화, 항산화 활성, 총 항산화능, 화학발광, 루미놀

자금 지원: 이 연구는 러시아 과학 재단(Grant No. 14-15-00375)의 지원을 받았습니다.

Ex3 서신: Georgy Konstantinovich Vladimirov

119192, 모스크바, Lomonosovsky Prospekt, 31, 건물 5; [이메일 보호됨]

기사 접수: 2016년 3월 10일 기사 출판 승인: 2016년 3월 18일

약용 식물 물질의 총 항산화 능력에 대한 화학발광 측정

1 러시아 모스크바 로모노소프 모스크바 주립대학교 기초의학부 의료생물물리학과

2 약학부 약리학과,

첫 번째 Sechenov 모스크바 주립 의과 대학, 모스크바, 러시아

키워드: 활성산소, 항산화, 항산화 활성, 총 항산화 능력, 화학발광, 루미놀

자금 지원: 이 연구는 러시아 과학 재단의 지원을 받았습니다. 14-15-00375.

감사의 말: 저자는 실험 수행에 도움을 준 Lomonosov Moscow State University의 Andrey Alekseev에게 감사드립니다. 서신을 다루어야 합니다: 게오르기 블라디미로프(Georgiy Vladimirov)

Lomonosovskiy 전망, d. 31, k. 5, 모스크바, 러시아, 119192; [이메일 보호됨]접수일: 2016년 3월 10일 접수일: 2016년 3월 18일

신체에 형성된 자유라디칼은 세포막의 구조를 파괴하고, 이는 결국 다양한 병리학적 상태를 발생시킵니다. 라디칼의 파괴적인 산화 효과는 저분자 화합물인 라디칼 차단제(트랩)가 중요한 역할을 하는 신체의 항산화 방어 시스템에 의해 방지됩니다. 항산화제의 공급원 중 하나는 약용 식물 재료와 이를 기반으로 한 약물이며, 항산화 잠재력에 대한 연구는 예방 및 치료 효과를 높이는 데 도움이 됩니다.

항산화제를 결정하는 주요 방법은 연구에서 논의되지만 화학 화합물로서의 항산화제 정의는 연구 대상의 보호 특성에 대한 완전한 그림을 제공하지 않습니다. 특정 항산화제의 양뿐만 아니라 뿐만 아니라 그들 각자의 활동에 의해서도 마찬가지입니다. 항산화 활성 또는 항산화 활성(AOA)은 항산화제와 자유 라디칼(kInH)의 반응 속도 상수입니다. 화학발광(CL) 방법을 사용하면 시료 내 항산화제와 결합하는 라디칼의 총량(총 항산화능, TCA)을 확인할 수 있으며, CL 동역학의 수학적 모델링 방법을 사용하는 경우 생성 및 반응 속도도 확인할 수 있습니다. 항산화제를 함유한 라디칼, 즉 AOA.

총 항산화 능력을 측정하기 위한 화학발광 방법의 가장 일반적인 변형은 루미놀을 화학발광 활성화제로 사용하는 것입니다. 샘플을 루미놀, 과산화수소 및 자연 분해(열분해)의 결과로 라디칼을 형성할 수 있는 화합물, 예를 들어 2,2"-아조비스-(2-아미디노프로판) 이염산염(ABAP)을 첨가하여 화학발광계 큐벳에 넣습니다. ):

분자 산소가 있는 경우, 알킬 라디칼 R^은 퍼옥실 라디칼 ROO^을 형성합니다.

ROO^ + LH2 ^ ROOH + LHv LH에서 중간 물질(루미놀 하이드로퍼옥사이드 및 루미놀 엔도퍼옥사이드)의 형성을 통해 루미놀 산화의 최종 생성물인 아미노프탈산 분자가 전자적으로 여기된 상태로 형성되어 광자를 방출합니다. , 그리고 그 결과 화학발광이 관찰된다. CL 강도는 광자 생성 속도에 비례하고, 다시 시스템 내 LH의 고정 농도에 비례합니다. 항산화제는 라디칼과 상호작용함으로써 설명된 변환 사슬을 방해하고 광자 형성을 방지합니다.

화학발광 방법을 사용하여 시료의 항산화 능력을 분석할 때 열분해에 민감한 화합물만이 라디칼의 유일한 공급원은 아닙니다. 대안으로는 양 고추냉이 과산화효소-과산화수소, 헤민-과산화수소, 시토크롬 c-카르디오리핀-과산화수소 등의 시스템이 있습니다. 과산화효소에 의한 루미놀 산화에 대한 반응 방식은 Cormier et al. .

이러한 시스템의 CL 동역학 곡선은 반응의 두 단계, 즉 CL 강도가 증가하는 단계와 발광의 고원 또는 점진적인 감소 단계를 반영합니다.

CL 강도는 일정하거나 천천히 감소합니다. 이 연구에서는 곡선의 이러한 특징을 고려하여 총 항산화 능력을 측정하는 두 가지 접근 방식을 설명합니다. TRAP(총 반응성 항산화 전위) 방법은 CL t의 잠복기를 측정하는 데 기반을 두고 있으며 Trolox 또는 아스코르브산과 같은 항산화제를 결정하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법은 라디칼과의 높은 반응 속도 상수를 특징으로 하며 이러한 이유로 다음이 가능합니다. 강력한 항산화제라고 합니다. 잠복기에는 완전한 산화가 발생합니다. TAR(총 항산화제 반응성) 방법은 화학발광 곡선의 안정기 또는 최대값에서 q의 화학발광 소멸 정도를 측정합니다.

여기서 I는 항산화제가 없는 화학발광 강도이고, 11은 항산화제가 있는 경우의 CL 강도입니다. 이 방법은 시스템에 라디칼과의 상호 작용 속도 상수가 낮은(루미놀 상수에 비해 훨씬 낮은) 약한 항산화제가 주로 포함되어 있는 경우에 사용됩니다.

항산화제의 효과는 지표 t와 c뿐만 아니라 특징이 있습니다. 작품에서 알 수 있듯이 헤민-H2O2-루미놀계의 요산이나 시토크롬 c-카르디오리핀-H2O2-루미놀계의 토코페롤, 루틴, 케르세틴 등의 항산화제 효과는 최대 비율의 변화를 특징으로 한다. CL(utx) 증가. 동역학의 수학적 모델링 결과에서 알 수 있듯이 이러한 항산화제와 라디칼의 상호 작용 속도 상수 값은 루미놀 상수 값에 가깝기 때문에 이러한 항산화제는 중간 강도의 항산화제라고 할 수 있습니다.

연구 대상 물질, 특히 식물 원료에 한 가지 유형의 항산화제가 포함되어 있는 경우 해당 함량은 위에 나열된 세 가지 지표(t, c 또는 V) 중 하나로 특성화될 수 있습니다. 그러나 식물 재료에는 다양한 강도의 항산화제가 혼합되어 있습니다. 이 문제를 해결하기 위해 일부 저자는 특정 시간 DE에 대한 화학 발광의 광합 변화를 사용하여 공식으로 계산했습니다.

DE = DE0 - DE,

DE0와 DE5는 주어진 시간 동안의 CL 조명 합계입니다. 대조 샘플과 테스트 샘플에서 각각. 시간은 시스템의 모든 항산화물질이 산화되는 데, 즉 테스트 샘플의 CL 곡선이 대조 샘플의 CL 곡선 수준에 도달하는 데 충분해야 합니다. 후자는 연구자들이 글로우의 빛의 합을 기록해야 할 뿐만 아니라 항상 수행되는 것은 아니지만 충분히 오랜 시간 동안 CL 동역학 곡선을 기록해야 한다고 가정합니다.

측정된 모든 매개변수는 장치 및 측정 조건에 따라 달라지므로 연구 대상 시스템에 있는 물질의 항산화 효과는 일반적으로 Trolox와 같은 표준 항산화제의 효과와 비교됩니다.

양 고추 냉이 과산화효소-과산화수소 시스템은 많은 저자에 의해 식물 재료의 총 항산화 능력을 분석하는 데 사용되었습니다. 시료 내 항산화 물질의 양을 추정하기 위해 CL의 잠복기(TRAP 방법)를 사용했으며, CL 발달 곡선 아래 면적을 작업에 사용했습니다. 그러나 나열된 작품은 명확한 정당성을 제공하지 않습니다.

OAU를 평가하기 위한 하나 또는 다른 매개변수의 선택.

연구의 목적은 다양한 유형의 항산화제 비율이 TOA에 어떻게 영향을 미치는지 확인하고, 식물 재료에서 TOA를 보다 정확하게 결정할 수 있는 방식으로 화학발광 방법을 수정하는 것이었습니다. 이를 위해 우리는 몇 가지 작업을 스스로 설정했습니다. 먼저, 어떤 유형의 항산화제가 연구 대상의 OAU에 주요 기여를 하는지 이해하기 위해 연구 대상의 CL 동역학을 세 가지 유형(강함, 중간, 약함)의 표준 항산화제의 동역학과 비교합니다. 둘째, OAE에 가장 큰 기여를 하는 항산화제의 작용과 비교하여 이러한 물체의 영향으로 인한 CL 광량의 감소를 측정하여 연구 중인 물체의 OAE를 계산합니다.

재료 및 방법

연구의 대상은 JSC Krasnogorskleksredstva(러시아)가 생산한 산사나무, 마가목, 장미 엉덩이의 산업 샘플과 자연 성장 조건 하에서 저자가 모스크바 지역에서 수집하고 60-80 °의 온도에서 건조시킨 라즈베리 과일이었습니다. C 눌렀을 때 주스 방출과 변형이 멈출 때까지.

화학발광법을 이용하여 항산화능을 분석하기 위한 시약은 KH2PO4, 20mM 완충용액(pH 7.4); 고추냉이 뿌리 유래 퍼옥시다제(활성도 112 단위/mg, M = 44,173.9), 1mM 수용액; 루미놀(5-아미노-1,2,3,4-테트라히드로-1,4-프탈라진디온, 3-아미노프탈산 히드라지드, M = 177.11), 1 mM 수용액; 과산화수소(H2O2, M = 34.01), 1mM 수용액; 항산화제 용액(아스코르브산, 케르세틴, 토코페롤). 모든 시약은 Sigma Aldrich(미국)에서 제조됩니다.

산사나무, 마가목, 로즈힙 열매의 달임과 라즈베리 열매의 주입은 일반 약전 기사 "주입 및 달임"에 명시된 소련 국가 약전의 방법에 따라 준비되었습니다.

총 항산화능 측정은 PowerGraph 3.3 소프트웨어를 사용하여 Lum-100 화학발광계(DISoft, Russia)에서 화학발광을 기록함으로써 수행되었습니다. 식물 재료의 OAE를 결정하기 위해 1mM 농도의 루미놀 40μl, 0.1μM 농도의 양 고추 냉이 퍼옥시다제 40μl, 달임 또는 주입액 10~50μl(농도에 따라 다름) 및 인산염 완충액을 첨가합니다. 필요한 양을 장치의 큐벳에 넣어 총 샘플 부피를 1ml로 만들었습니다. 큐벳을 장치에 설치하고 배경 신호를 관찰하면서 CL을 기록했습니다. 48초 동안 배경 신호를 기록한 후, 1mM 농도의 H2O2 100μl를 큐벳에 첨가하고 CL 기록을 10분간 계속했습니다. 각 식물 개체의 서로 다른 농도를 사용하여 4개의 샘플을 준비했습니다. CL은 또한 각 항산화제에 대해 5가지 다른 농도의 아스코르브산, 케르세틴 및 토코페롤 용액에 대해 기록되었습니다. 그 후, 달인 및 주입 샘플의 OAU를 퀘르세틴으로 다시 계산했습니다.

루미놀, 고추냉이 과산화효소 및 과산화수소의 농도는 허용되는 시간(10분 이내) 내에 약용 식물 재료에서 추출한 수성 추출물의 항산화 능력을 결정하기 위해 선택되었습니다. 이 기간 동안 항산화제인 아스코르베이트와 플라보노이드 케르세틴(식물 재료의 주요 항산화제)에 대한 화학발광 곡선이 나타납니다.

시스템에서 항산화 물질이 완전히 파괴되었음을 나타내는 정체기에 도달했습니다. 연구된 샘플의 희석과 표준 항산화제 용액의 농도(그림 캡션에 표시됨)는 모든 CL 동역학 곡선이 장치의 동일한 감도에서 측정되는 방식으로 선택되었습니다.

항산화제 함유 물질 첨가 시 화학발광 동역학 곡선(광합) 하의 면적 변화(AS)로부터 항산화능을 계산하였다. 이를 위해 우리는 항산화제가 없는 시스템에 대해 S0를 계산하고 여기서 항산화제가 첨가된 시스템의 특징인 SS 면적을 뺍니다. AS 값은 화학루미노미터의 감도와 측정 조건에 따라 달라집니다. AS/C ■ V 비율(여기서 C는 큐벳 내 연구된 생물학적 물질의 농도, g/l, V는 큐벳의 부피, l)은 연구된 물질 1g의 항산화 능력을 나타냅니다. , 식물 원료.

비슷한 방식으로, 동일한 부피의 반응 혼합물에 넣은 표준 항산화제(예: 케르세틴) 용액의 항산화 능력 ASa를 계산했습니다. AS/Cä ■ V 비율(CA는 큐벳에 들어 있는 항산화제의 중량 농도, g/l)은 항산화제 1g의 항산화 능력을 나타냅니다.

각 표준 항산화제에 대해 여러 농도의 용액에서 나오는 신호를 기록하여 계산이 선형 관계 내에 있고 얻은 결과가 재현 가능하다는 것을 확인했습니다. 실제로 농도에 대한 신호의 선형 의존성(ASa = kA ■ CA)이 얻어졌으며, 이로부터 화학양론적 계수 kA가 계산되었습니다. Fisher 기준에 따르면 표준 항산화제에 대해 얻은 kA 값은 0.975의 확률로 통계적으로 유의합니다. 다음으로, 4가지 식물 샘플 각각에 대해 4가지 농도의 신호를 기록하고, 모든 샘플에 대해 농도에 대한 신호의 선형 의존성을 얻었으며(AS = k n C), 이로부터 화학양론적 계수 k가 계산되었습니다. 0.975(피셔 검정)의 확률로 식물 샘플에서 얻은 k 값은 통계적으로 유의합니다. 표준 항산화제의 질량(mg%)으로 나타낸 식물 재료의 총 항산화 능력은 다음 공식을 사용하여 구했습니다.

OAE = k ■ 105. k

값은 p에서 산술 평균 ± 표준 편차(M ± 5)로 표시되었습니다.<0,05.

연구 결과

아스코르브산 나트륨 존재 하에서 화학 발광 동역학에 대한 연구(그림 1)는 이 항산화제가 CL이 거의 완전히 억제되는 잠복기를 특징으로 한다는 것을 보여주었습니다. 그 기간은 시스템의 항산화 양에 비례합니다. 이 경우 CL 곡선의 기울기나 고원의 CL 강도는 변하지 않습니다. 이는 아스코르브산이 루미놀 라디칼을 포함하여 시스템에서 형성된 모든 라디칼을 차단하는 강력한 항산화제이며 모든 아스코르베이트가 산화될 때까지 CL이 발생하지 않는다는 사실로 설명됩니다.

토코페롤의 효과(그림 2)는 고원의 CL 강도 감소로 나타났습니다. 이는 약한 항산화제의 전형적인 현상이지만 토코페롤은 가장 강력한 항산화제 중 하나로 간주됩니다.

강력한 항산화제. 아마도 이러한 불일치는 우리 실험에서 자유 라디칼이 수용액에 존재하는 반면 토코페롤의 효과는 일반적으로 비극성 매질에서 연구된다는 사실 때문일 것입니다. 라디칼의 근원이 카디오리핀과 시토크롬 C의 복합체이고 이 복합체 내에서 루미놀과의 반응이 일어나는 연구에서 토코페롤은 중간 강도의 항산화제 특성을 가졌습니다.

다양한 농도의 퀘르세틴이 우리 시스템에 미치는 영향을 연구하고(그림 3) 이 시스템과 아스코르브산나트륨 및 토코페롤의 동역학 곡선을 비교한 결과, 퀘르세틴의 주요 효과는 곡선, 즉 중간 강도의 항산화제에 전형적인 CL의 발달 속도입니다.

연구된 모든 달인에 대한 CL 곡선(그림 4)은 끝 부분에서 CL 강도가 약간 감소하는 퀘르세틴의 곡선과 유사합니다.

시간, 분

쌀. 1. 화학발광 동역학에 대한 아스코르브산나트륨의 영향

시스템 구성 요소의 농도: 루미놀 - 40 μM, 고추냉이 과산화효소 - 4 nM, 과산화수소 - 100 μM. 곡선: 1 - 대조 샘플; 2 - 0.05 μM; 3 - 0.10 μM; 4 - 0.15 μM; 5 - 0.2 μM; 6 - 0.25 μM 나트륨 아스코르베이트.

고원. 연구에서 볼 수 있듯이 이러한 행동은 폴리페놀(플라보노이드 및 탄닌)을 포함하는 중간 강도의 항산화제에 일반적입니다. 라즈베리 과일 주입의 경우(그림 4, D), 고원 수준에서 화학 발광이 눈에 띄게 감소하는데, 이는 약한 항산화제(이 경우 토코페롤)의 전형적인 현상입니다. 케르세틴과 토코페롤의 경우, 라즈베리 주입에는 케르세틴 4.7 ± 0.9 µmol/g과 토코페롤 11.9 ± 0.8 µmol/g이 포함되어 있습니다.

식물 재료에서 연구된 4가지 수성 추출물의 다양한 농도에 대해 얻은 화학 발광 곡선을 비교할 때 샘플의 전체 항산화 능력에 대한 중간 및 약한 항산화제의 기여도가 다음 시리즈에서 감소하는 것으로 나타났습니다. 라즈베리 주입(그림 4) , D), 로즈힙 달임(그림 4, B), 마가목 달임(그림 4, A), 산사나무 열매 달임(그림 4, B). 큐벳 내 연구 물질의 농도 C에 따른 AS 값과 퀘르세틴 기준 총 항산화 능력 값이 표에 나와 있습니다.

결과에 대한 논의

실험 중에 얻은 데이터와 이를 기반으로 계산된 연구 대상의 OAE 값을 화학적 분석 방법을 사용하여 결정된 주요 항산화제 함량과 비교했습니다. 다양한 대상의 항산화제 총량과 TAU 사이의 긍정적인 상관관계가 있다는 사실에도 불구하고 이러한 지표 간에는 여전히 눈에 띄는 차이가 있습니다. 예를 들어, 플라보노이드, 탄닌 및 아스코르브산 함량의 합을 취하면 산사나무 열매 달임(표)을 제외하고 모든 연구 대상에 대해 계산된 TAU보다 큰 것으로 나타납니다.

다른 연구자들도 화학적 분석 결과와 화학발광 방법으로 결정된 TAU 값이 일치하지 않는 경우가 많다는 사실을 보여주었습니다. 작동 중 총 항산화 능력이 결정됩니다.

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나" "아치---.

쌀. 2. 토코페롤이 화학발광 동역학에 미치는 영향

시스템 구성 요소의 농도: 루미놀 - 40 μM, 고추냉이 과산화효소 - 4 nM, 과산화수소 - 100 μM. 곡선: 1 - 대조 샘플; 2 - 0.01 μM; 3 - 0.025 μM; 4 - 0.06 μM; 5 - 0.1 μM; 6 - 0.2 μM 토코페롤.

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쌀. 3. 케르세틴이 화학발광 동역학에 미치는 영향 시스템 구성 요소의 농도: 루미놀 - 40μM, 고추냉이 과산화효소 - 4nM, 과산화수소 - 100μM. 곡선: 1 - 대조 샘플; 2 - 0.02 μM; 3 - 0.03 μM; 4 - 0.04 μM; 5 - 0.05 μM; 6 - 0.06 μM 케르세틴.

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120 나 100 80\60 40 20

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쌀. 4. 마가목 열매(A), 산사나무속(B), 장미 엉덩이(C) 및 라즈베리 주입(D)의 달임이 화학발광 동역학에 미치는 영향: 루미놀 - 40μM, 양 고추냉이 과산화효소 - 4 nM, 과산화수소 - 100μM . (A) 곡선: 1 - 대조 샘플; 2 - 0.002g/l; 3 - 0.004g/l; 4 - 0.006g/l; 마가목 열매 5 - 0.008 g/l 달임. (B) 곡선: 1 - 대조 샘플; 2 - 0.005g/l; 3 - 0.0075g/l; 4 - 0.01g/l; 5 - 0.0125 g/l 산사나무 열매 달임. (B) 곡선: 1 - 대조 샘플; 2 - 0.001g/l; 3 - 0.0015g/l; 4 - 0.002g/l; 5 - 0.0025 g/l 로즈힙 달임. (D) 곡선: 1 - 대조 샘플; 2 - 0.001g/l; 3 - 0.003g/l; 4 - 0.004g/l; 5 - 0.005 g/l의 라즈베리 과일 주입.

퍼옥시다제-루미놀-과산화수소 시스템에서는 트리테르펜 화합물의 함량과 상관 관계가 있습니다. 그러나 연구 대상이 다른 식물인 동일한 저자의 연구에서는 플라보노이드를 포함한 모든 물질 그룹의 함량과 OAE의 상관 관계를 관찰하지 못했습니다.

이러한 불일치는 적어도 세 가지 요인과 관련이 있습니다. 첫째, 항산화제의 활성, 즉 식물 샘플에 포함된 다양한 항산화제에 따라 라디칼과의 상호 작용 속도가 중요합니다. Izmailov에 따르면 멕시돌, 토코페롤 및 케르세틴에 대한 해당 반응의 속도 상수는 0.04:2:60의 상관 관계가 있습니다. 둘째, 화학 반응에 들어가는 각 항산화 분자는 서로 다른 수의 라디칼을 차단할 수 있습니다. 연구에 따르면, 케르세틴, 요산 및 아스코르브산은 반응된 항산화 분자당 각각 3.6 ± 0.1, 1.4 ± 0.1 및 0.5 ± 0.2 라디칼을 차단했습니다(헤민-H2O2-루미놀 시스템이 사용됨). 세 번째로, 연구 결과는 작업에서와 같이 식물 샘플 자체의 퍼옥시다제 활성 존재뿐만 아니라 샘플 내 칼슘의 존재에 의해 영향을 받을 수 있습니다. 특정 조건에서 양 고추 냉이 퍼옥시다제의 활성. 이는 일반적으로 더 많은 결과로 이어집니다.

그러나 우리는 관찰하지 못한 제어 곡선보다 고원에서 더 높은 CL 강도를 나타냈습니다.

첫 번째 요소는 광합의 변화와 같은 매개변수의 사용을 급격히 제한합니다. 왜냐하면 화학발광을 측정하는 시간은 테스트 샘플의 모든 항산화제를 소비하는 시간보다 길어야 하기 때문입니다. 이 순간의 발생은 화학발광의 동역학을 측정함으로써만 판단할 수 있습니다. 또한, OAU에 대한 약한 항산화제의 기여는 완전히 과소평가되는데, 그 이유는 완전한 산화 시간이 허용되는 측정 기간(10-20분)보다 몇 배 더 길기 때문입니다.

항산화제의 화학양론적 계수는 훨씬 더 중요합니다. 그것에 의해 차단된 라디칼 n의 수는 다음과 같습니다.

여기서 p는 화학량론적 계수이고, Am은 측정 시간 동안의 항산화제 농도 변화입니다. 이 경우에는 테스트 샘플 내 테스트 물질의 초기 농도입니다.

항산화제가 없을 때와 존재할 때의 발광 광량의 차이는 n에 비례합니다. 차단된 라디칼의 총 수는 n = Y.p와 같습니다. 중,

는 특정 산화방지제의 화학양론적 계수이고, m은 측정 중 농도입니다.

연구 대상 플라보노이드, mg%* 탄닌, mg%* 아스코르브산, mg%* AS/C ■ 10-8, arb. 단위 TAU, mg% 케르세틴

마가목 달임 8.87 ± 0.01 210.00 ± 10.00 0.67 ± 0.02 7.13 ± 0.96 56.53 ± 7.61

로즈힙 달임 4.66 ± 0.04 850.00 ± 20.00 3.70 ± 0.12 16.60 ± 3.40 131.63 ± 27.26

산사나무 열매 달임 3.01 ± 0.06 12.00 ± 3.00 0.23 ± 0.002 3.18 ± 0.29 25.20 ± 2.32

건조 라즈베리 열매 주입 90.00 ± 4.00 40.00 ± 20.00 3.91 ± 0.08 6.65 ± 1.21 52.69 ± 9.56

참고: * - 문헌 데이터, . AS - 샘플의 광량 변화, rel. 단위, C - 큐벳 내 샘플 농도, g/l. 계산된 값은 p에서 신뢰할 수 있습니다.<0,05. Число измерений для каждого образца - четыре.

레니아. 차단된 라디칼의 총 수는 확실히 항산화제의 총량과 같지 않습니다. 왜냐하면 pt 계수는 1일 뿐만 아니라 항산화제마다 크게 다르기 때문입니다.

n 값은 항산화제가 포함된 샘플과 항산화제가 포함되지 않은 대조 샘플 사이에서 특정 시간 동안 측정된 광량의 차이에 비례합니다.

여기서 k는 동일한 측정 조건에서 일정한 계수입니다.

기사에서 논의된 방법을 사용하면 총 항산화제 용량을 결정할 수 있으며, 화학적 분석을 통해 제품의 총 항산화제 함량을 결정할 수 있습니다. 따라서 화학발광 방법은 화학적 분석보다 더 많은 정보를 제공하는 것으로 보입니다.

우리는 고추냉이 과산화효소, 과산화수소 및 루미놀(성분 농도 - 각각 4nM, 100μM 및 40μM, 20mM 인산염)로 구성된 시스템에서 화학발광 동역학을 기록하여 식물 원료의 총 항산화 능력을 평가하기 위한 조건을 선택했습니다. 완충액, pH 7.4),

강력한 항산화제(아스코르브산)와 중간 강도의 항산화제(케르세틴)를 10분 만에 산화시킵니다. 이 측정 기간은 편리하며 필요한 측정 품질을 보장합니다.

화학발광 동역학 분석에 따르면 연구 대상(마가목 열매, 장미 엉덩이, 산사나무 열매 주입)에서 주요 항산화제는 플라보노이드를 포함한 중간 강도의 항산화제와 약한 강도(토코페롤 등)인 것으로 나타났습니다. 화학발광 광량의 감소에 기초하여 연구대상의 총 항산화능을 계산하였다. 얻은 TAU 값과 화학 분석 결과를 비교하면 동일한 양의 항산화제를 다른 비율로 함유한 제품이 자유 라디칼의 유해한 영향으로부터 신체를 효과적으로 보호하는 능력이 다를 수 있음이 나타났습니다. 설명된 기술은 다양한 항산화제의 혼합물을 포함하는 식물 개체를 연구하는 데 유망합니다. 동시에 단순성과 저렴한 연구 비용이 특징입니다. 화학발광 동역학 측정과 반응의 수학적 모델링을 결합하면 TAU 결정 과정을 자동화할 수 있을 뿐만 아니라 개별 항산화제 그룹이 지표에 미치는 영향을 결정할 수도 있습니다.

문학

1. Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. 규제 및 병리학 과정의 참가자로서의 자유 라디칼. In: Grigoriev A.I., Vladimirov Yu.A., 편집자. 기초 과학 - 의학. 생물 물리학. 꿀. 기술. M.: MAX 프레스; 2015. 1. p. 38-71.

3. Khasanov V.V., Ryzhova G.L., Maltseva E.V. 항산화제 연구 방법. 화학. 마지막. 원료. 2004년; (3): 63-75.

4. Vasiliev R. F., Kancheva V. D., Fedorova G. F., Butovska D. I., Trofimov A. V. 칼콘의 항산화 활성. 반응성의 화학발광 측정과 시약 및 중간체의 에너지와 구조에 대한 양자화학 계산. 동역학 및 촉매작용. 2010; 51(4): 533-41.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil"ev RF, Veprintsev TL. Peroxy-

라디칼 매개 화학발광: 항산화 분석의 기계적 다양성과 기초. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. H2O2-헤민 유도 루미놀 화학발광에 의한 항라디칼 능력 평가. J농식품화학. 2003년 12월 3일; 51(25): 7481-8.

9. Vladimirov Yu., Proskurnina E. V. 자유 라디칼 및 세포 화학 발광. Uspekhi biol. 화학. 2009; 49: 341-88.

10. Vladimirov Yu. A., Proskurnina E. V., Izmailov D. Yu. 자유 라디칼의 반응을 연구하는 방법으로서의 운동 화학 발광. 생물 물리학. 2011; 56(6): 1081-90.

11. Izmailov D. Yu., Demin E. M., Vladimirov Yu. A. 화학발광 역학을 측정하여 항산화 활성을 결정합니다. 광생물학 및 광의학. 2011; 7(2):70-6.

12. Lissi EA, Pascual C, 델 카스티요 MD. 2.2"-Azo-bis(2-amidinopropane) 열분해에 의해 유도된 루미놀 발광. 무료

Radic Res Commun. 1992; 17(5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, 델 카스티요 MD. SOD 활성을 평가하기 위해 루미놀 발광의 소멸을 사용하는 방법. Free Radic Biol Med. 1994년 6월; 16(6): 833-7.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. 루미놀 강화 화학발광 측정을 통한 총 항산화 잠재력(TRAP) 및 총 항산화 반응성 평가. Free Radic Biol Med. 1995년 2월; 18(2): 153-8.

17. 코미어 MJ, 프리차드 PM. 정지 흐름 기술을 통한 루미놀의 발광 과산화 메커니즘 조사. J Biol Chem. 1968년 9월 25일; 243(18): 4706-14.

21. Alekseev A.V., Proskurnina E.V., Vladimirov Yu.A. 2,2"-아조-비스(2-아미디노프로판)을 사용한 활성화된 화학발광에 의한 항산화제 측정. Vestn. MGU. Ser. 2. Chem 2012;53(3): 187-93.

24. 소련 XI ed의 소련 국가 약전 보건부. Vol. 2 “일반적인 분석 방법. 약용식물 원료." M.: 의학; 1987. p. 147-8.

25. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Kornyushina M. A. 로즈힙 추출 준비 연구. 약국. 2012; (2): 14-6.

26. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Avrach A. S. 다양한 보존 및 수성 추출 방법을 사용하여 산사나무 열매에 대한 연구. 약국. 2010; (5): 16-8.

27. Avrach A. S., Sergunova E. V., Kuksova Ya. V. 과일 및 일반 라즈베리의 수성 추출물의 생물학적 활성 물질. 약국. 2014년; (1): 8-10.

28. Avrach A. S., Samylina I. A., Sergunova E. V. 산사나무 열매의 생물학적 활성 물질에 대한 연구 - 동종요법 매트릭스 팅크 제조용 원료. 토요일에. 과학적 tr. XXIV Moscow의 자료를 기반으로합니다. 국제적인 동종 요법. conf. “현대의학의 동종요법 방법의 발전”; 2014년 1월 24~25일; 모스크바. 중.; 2014.p. 146-7.

29. Sergunova E. V., Sorokina A. A. 다양한 보존 방법의 약용 식물 원료의 생물학적 활성 물질 구성 연구. 토요일에. XX Ross의 자료를 바탕으로 한 논문. 국가의 의회 "인간과 의학"; 2013년 4월 15~19일; 모스크바. M.: EKOOnis; 2013.p. 184-90.

30. Aleksandrova E. Yu., Orlova M.A., Neiman P. L. 양 고추 냉이 뿌리 줄기 및 뿌리 추출물의 과산화효소 활성 및 다양한 영향에 대한 안정성 연구. Vestn. 모스크바 주립대학교. Ser. 2. 화학. 2006년; 47(5): 350-2.

1. Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Svobodnye radikaly kak uchastniki regulyatornykh i patologicheskikh protsessov. In: Grigor"ev AI, Vladimirov YuA, 편집자. 기본"nye nauki - 약. Biofizicheskie meditsinskie tekhnologii. 모스크바: MAKS Press; 2015.v. 1. p. 38-71. 러시아인.

2. Chanda S, Dave R. 항산화 활성 평가를 위한 시험관 내 모델 및 항산화 특성을 보유한 일부 약용 식물: 개요. Afr J Microbiol Res. 2009년 12월; 3 (13): 981-96.

3. Khasanov VV, Ryzhova GL, Mal"tseva EV. Metody issledovaniya antioksidantov. Khimija Rastitel"nogo Syr"ja. 2004; (3): 63-75. 러시아어.

4. Vasil"ev RF, K""ncheva VD, Fedorova GF, B""tovska DI, Trofimov AV. Antioksidantnaya aktivnost" khalkonov. Khemilyuminestsentnoe opredelenie reaktsionnoi sposobnosti i kvantovo-khimicheskii raschet energii i stroeniya 시약 및 중개자. 동역학 및 촉매작용. 2010; 51(4): 533-41. 러시아인.

5. Slavova-Kazakova AK, Angelova SE, Veprintsev TL, Denev P, Fabbri D, Dettori MA 등 화학발광 동역학, 사슬 파괴 효율, 소거 활성(ORAC) 및 DFT 계산을 통해 연구된 커큐민 관련 화합물의 항산화 잠재력. Beilstein J Org Chem. 2015년 8월 11일; 11: 1398-411.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil'ev RF, Veprintsev TL. Peroxy-radical-medium chemiluminescent: 항산화 분석의 기계적 다양성 및 기초. 8: 163-215.

7. Fedorova GF, Menshov VA, Trofimov AV, Vasil"ev RF. 식물성 지질의 항산화 특성에 대한 손쉬운 화학발광 분석: 기본 및 예시. Analyst. 2009 Oct; 134(10): 2128-34.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. H2O2-헤민 유도 루미놀에 의한 항라디칼 능력 평가

9. Vladimirov YuA, Proskurnina EV. Svobodnye radikaly i kletochnaya khemilyumiminestsentsiya. Usp 비올 김. 2009; 49: 341-88. 러시아인.

10. Vladimirov YuA, Proskurnina EV, Izmailov DYu. Kineticheskaya khemilyuminestsentsiya kak metod izucheniya reaktsii svobodnykh radikalov. 생물 물리학. 2011; 56(6): 1081-90. 러시아인.

11. Izmailov DYu, Demin EM, Vladimirov YuA. Opredelenie aktivnosti antioksidantov metodom izmereniya kinetiki khemilyumiminestsen-tsii. Fotobiologiya 및 fotomeditsina. 2011; 7(2):70-6. 러시아인.

12. Lissi EA, Pascual C, 델 카스티요 MD. 2,2"-아조-비스(2-아미디노프로판) 열분해에 의해 유도된 루미놀 발광. Free Radic Res Commun. 1992; 17(5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, 델 카스티요 MD. SOD 활성을 평가하기 위해 루미놀 발광의 소멸을 사용하는 방법. Free Radic Biol Med. 1994년 6월; 16(6): 833-7.

14. Lissi EA, Escobar J, Pascual C, Del Castillo MD, Schmitt TH, Di Mascio P. 메트헤모글로빈 또는 옥시헤모글로빈과 과산화수소 사이의 반응과 관련된 가시적 화학발광. 포토켐 포토비올. 1994년 11월; 60(5): 405-11.

16. Landi-Librandi AP, de Oliveira CA, Azzolini AE, Kabeya LM, Del Ciampo JO, Bentley MV 등 HRP-H2O2-루미놀 시스템에 의한 리포솜 플라보놀의 항산화 활성에 대한 시험관 내 평가. J 마이크로캡슐. 2011; 28(4): 258-67.

17. 코미어 MJ, 프리차드 PM. 메커니즘 조사

정지 흐름 기술에 의한 루미놀의 발광 과산화. J Biol Chem. 1968년 9월 25일; 243(18): 4706-14.

18. 장 CL, 린 CS, 라이 GH. 5가지 약용식물 추출물의 식물화학적 특성, 활성산소 소거활성 및 신경보호 효과. Evid 기반 보완 Alternat Med. 2012; 2012: 984295. doi: 10.1155/2012/984295. Epub 2011년 8월 10일.

19. 장 CL, 린 CS. Terminalia chebula Retzius 추출물의 식물화학적 조성, 항산화 활성 및 신경보호 효과. Evid 기반 보완 Alternat Med. 2012; 2012: 125247. doi: 10.1155/2012/125247. Epub 2011년 7월 5일.

20. Georgetti SR, Casagrande R, Di Mambro VM, Azzolini AE, Fonseca MJ. 화학발광법을 이용한 다양한 플라보노이드의 항산화 활성 평가. AAPS PharmSci. 2003년; 5(2):111-5.

21. Alekseev AV, Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Opredelenie antioksidantov metodom aktivirovannoi khemilyuminestsentsii s ispol"zovaniem 2,2"-azo-bis(2-amidinopropana). 모스크바 대학 화학 게시판. 2012; 53(3): 187-93. 러시아인.

22. Pogacnik L, Ulrih NP. 허브 추출물의 항산화 능력 측정을 위한 최적화된 화학발광 분석의 적용. 발광. 2012년 11~12월; 27(6): 505-10.

23. Saleh L, Plieth C. 요약 매개변수로서 총 저분자량 항산화제. 화학발광 억제 분석을 통해 생물학적 샘플에서 정량화됨. Nat Protoc. 2010년 9월; 5 (10): 1627-34.

24. Ministerstvo zdravookhraneniya SSSR. Gosudarsvennaya farmakopeya SSSR. 11판 발행 2. "Obshchie metody 분석."

Lekarstvennoe rastitel "noe syr"e". 모스크바: Medltsina, 1987. p. 147-8. 러시아어.

25. Sergunova EV, Sorokina AA, Kornyushina MA. Izuchenie ekstraktsionnykh preparatov shipovnika. 약국. 2012; (2): 14-6. 러시아인.

26. Sergunova EV, Sorokina AA, Avrach AS. Izuchenie plodov boyaryshnika razlichnykh sposobov konservatsii i vodnykh izvlechenii. Farmatsiya. 2010; (5): 16-8. 러시아인.

27. Avrach AS, Sergunova EV, Kuksova YaV. Biologicheski aktivnye veshchestva plodov i vodnykh izvlechenii maliny obyknovennoi. Farmatsiya. 2014년; (1): 8-10. 러시아인.

28. Avrach AS, Samylina IA, Sergunova EV. Izuchenie biologicheski aktivnykh veshchestv plodov boyaryshnika - syr"ya dlya prigotovleniya nastoek gomeopaticheskikh matrichnykh. 제14차 모스크바 국제 동종요법 회의 간행물 "Razvitie gomeopaticheskogo methoda v sovremennoi meditsine"; 2014년 1월 24-25일; Moscow M. 2014. 7. 러시아어 .

29. 세르구노바 EV, 소로키나 AA. Izuchenie sostavaologicalheski aktivnykh veshchestv v lekarstvennom rastitel "nom syr"e razlichnykh sposobov konservatsii. 제20차 러시아 국회 "Chelovek i lekarstvo" 간행물; 2013년 4월 1519년; 모스크바. 모스크바: EkOOnis; 2013.p. 184-90. 러시아인.

30. Aleksandrova EYu, Orlova MA, Neiman PL. Izuchenie peroksidaznoi aktivnosti v ekstraktakh iz kornevishcha i kornei khrena i ee stable "nosti k razlichnym vozdeistviyam. Moscow University Chemistry Bulletin. 2006; 47(5): 350-2. 러시아어.